簡介：腸道71型病毒，是小核糖體病毒中的一種，能在人和動物中引起手足口病，在個(gè)別嚴(yán)重病例中，能夠破壞中樞神經(jīng)系統(tǒng)，從而引起病毒性腦膜炎，腦炎，以及重癥心肌炎，以及致命的肺水腫。由于兒童的免疫系統(tǒng)相對脆弱，所以特別容易收到此類病毒的感染。1998年，在臺灣爆發(fā)了一場由EV71病毒引發(fā)的感染病，總共有120，000名兒童被感染并造成了78人死亡，在2008年5月，中國衛(wèi)生局報(bào)道了一場在中國安徽由EV71病毒引發(fā)的大規(guī)模感染病，截止到5月7日，總共造成28人死亡。目前，世界上還沒有能夠治療此類病毒的有效藥物，腸道71型病毒的3C蛋白酶是病毒大的多聚蛋白前提水解成單個(gè)成熟蛋白所必須的，它是由病毒基因組翻譯而來的，所以被認(rèn)為是治療小核糖體病毒感染的重要靶點(diǎn)蛋白。在本實(shí)驗(yàn)中，我們在基于EV713C蛋白酶結(jié)構(gòu)的基礎(chǔ)上通過晶體與化合物分子共晶和高通量分子藥物篩選的方法尋找能夠抑制此病毒蛋白酶的有效抑制劑。具體方法就是通過基因工程手段將EV713C蛋白酶的基因?qū)氪竽c桿菌BL21DE3感受態(tài)細(xì)胞，使其獲得大量表達(dá)，并通過鎳柱層析，陽離子交換層析等手段獲得高純度蛋白，以進(jìn)一步用于蛋白結(jié)晶和藥物篩選。AG7088被認(rèn)為是能夠有效抑制冠狀病毒蛋白酶的有效藥物，它是一種多肽類藥物，我們在基于此化合物的基礎(chǔ)上合成了一系列衍生物和結(jié)構(gòu)類似藥物，并篩選出了能夠有效抑制EV71病毒的有效抑制劑。EV71病毒RNA依賴的RNA聚合酶3D是病毒基因組編碼的重要的酶，它催化了病毒基因組的復(fù)制和轉(zhuǎn)錄。由于在宿主細(xì)胞中沒有類似的RNA依賴的RNA聚合酶，所以這類聚合酶就也成為了抗EV71病毒藥物開發(fā)的首選靶標(biāo)。在本實(shí)驗(yàn)中，我們將EV713D蛋白酶的基因?qū)氪竽c桿菌BL21感受態(tài)細(xì)胞，通過GST（谷胱甘肽轉(zhuǎn)移酶）親和層析柱和陰離子交換柱純化蛋白獲得高純度蛋白，為后續(xù)的蛋白質(zhì)結(jié)晶做好鋪墊。同時(shí)我們建立了針對3C蛋白酶和3D聚合酶抑制劑的細(xì)胞病毒篩選體系，為更好的篩選3D聚合酶的抑制劑做好了鋪墊。此外，我們還得了3D聚合酶與基因組編碼的22個(gè)氨基酸的VPG3B的復(fù)合物的晶體，并建立了EV71VPG尿苷?；饔媚Ｐ?，為進(jìn)一步研究研究EV71病毒的生理特征奠定了基礎(chǔ)。

簡介：安徽醫(yī)科大學(xué)ANHUIMEDICALUNIVERSITY碩士學(xué)位論文碩士學(xué)位論文MICRNA生物合成生物合成基因多態(tài)性與鼻咽癌基因多態(tài)性與鼻咽癌和乙型肝炎乙型肝炎病毒病毒相關(guān)肝癌相關(guān)肝癌的遺傳關(guān)聯(lián)研究遺傳關(guān)聯(lián)研究GEICASSOCIATIONSOFMICRNABIOGENESISGENESPOLYMPHISMSWITHTHENASOPHARYNGEALCARCINOMAHEPATITISBVIRUSRELATEDHEPATOCELLULARCARCINOMA作者姓名作者姓名孟金鳳指導(dǎo)教師指導(dǎo)教師周鋼橋研究員專業(yè)名稱專業(yè)名稱遺傳學(xué)研究方向研究方向醫(yī)學(xué)遺傳學(xué)與基因組學(xué)論文工作時(shí)間論文工作時(shí)間2010年3月至2012年4月目錄摘要1ABSTRACT3主要英文縮寫一覽表5第一章MICRNA生物合成基因多態(tài)性與鼻咽癌的遺傳關(guān)聯(lián)研究6第一節(jié)MICRNA生物合成基因多態(tài)性與鼻咽癌易感性和嚴(yán)重程度的相關(guān)性61引言62材料和方法921人群招募922SNPS的選擇和基因分型923統(tǒng)計(jì)學(xué)分析133結(jié)果1331研究人群的社會人口學(xué)和臨床特征1332RS3928672與鼻咽癌易感性的相關(guān)性分析1433RS3928672與鼻咽癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的相關(guān)性分析1434RS3928672的薈萃分析1935RS3928672所在區(qū)域的連鎖不平衡分析1936RS3928672的分層分析2037RS3928672的功能預(yù)測214討論21第二節(jié)AGO2在鼻咽癌中的功能研究231引言232材料和方法2521主要實(shí)驗(yàn)材料2522主要實(shí)驗(yàn)方法25221人鼻咽癌上皮細(xì)胞系CNE2Z的培養(yǎng)25222AGO2RNAI載體的構(gòu)建25223質(zhì)粒的提取與鑒定25224CNE2Z細(xì)胞系總RNA的提取26225CNE2Z細(xì)胞系A(chǔ)GO2蛋白表達(dá)量的檢測26226免疫組化分析27227抑制AGO2表達(dá)對細(xì)胞遷移能力的影響27228抑制AGO2表達(dá)的MIRNA和MRNA表達(dá)譜分析2723統(tǒng)計(jì)分析和生物信息學(xué)分析29231統(tǒng)計(jì)分析29232生物信息學(xué)分析293結(jié)果2931臨床樣本特征29

簡介：點(diǎn)擊查看更多貓白血病病毒C亞類受體（FLVCR）在人類紅細(xì)胞造血中的作用.pdf精彩內(nèi)容。

簡介：目前尚缺乏有效的控制病毒感染的手段補(bǔ)體系統(tǒng)因?yàn)榫哂锌梢灾苯尤芙獠《?、中和病毒感染、調(diào)理病毒吞噬建立一線防御等方面的功能和優(yōu)勢而對病毒感染性疾病的防治具有重要意義然而遺憾的是由于病毒在長期的演化過程中獲得了逃避補(bǔ)體攻擊的機(jī)制而使得補(bǔ)體系統(tǒng)在抗病毒免疫中的功能和優(yōu)勢不能充分發(fā)揮為了充分發(fā)揮補(bǔ)體系統(tǒng)在抗病毒感染中的優(yōu)勢和潛力該研究提出了通過消除病毒逃避補(bǔ)體攻擊的機(jī)制來恢復(fù)病毒對補(bǔ)體的敏感性同時(shí)通過誘導(dǎo)補(bǔ)體活化來提高補(bǔ)體的抗病毒效率的設(shè)想并對該設(shè)想進(jìn)行了驗(yàn)證根據(jù)該實(shí)驗(yàn)的結(jié)果我們可以得出下面的結(jié)論1病毒在出芽的過程中結(jié)合的宿主膜補(bǔ)體調(diào)節(jié)蛋白CD55、CD59可以作為消除病毒逃避補(bǔ)體攻擊的機(jī)制提高補(bǔ)體抗病毒效率這一策略的靶點(diǎn)2可以通過制備針對病毒抗原及病毒表面的補(bǔ)體調(diào)節(jié)蛋白的含F(xiàn)C段的雙特異性三功能抗體實(shí)現(xiàn)特異性消除病毒表面的補(bǔ)體調(diào)節(jié)蛋白對病毒的保護(hù)作用恢復(fù)病毒對補(bǔ)體的敏感性誘導(dǎo)內(nèi)源性補(bǔ)體活化提高補(bǔ)體的抗病毒效率的目的3能夠結(jié)合CD55抗原的含人FC段的IGG型基因工程雙特異性抗體的構(gòu)建為下一步用這種策略制備抗病毒的雙特異性抗體奠定了良好的基礎(chǔ)

簡介：病毒性心肌炎VIRALMOYCARDITISVMC是臨床多發(fā)病目前尚缺乏有效治療藥物和措施嚴(yán)重的威脅人們的健康。腸道病毒中的柯薩奇病毒B組3型COXSACKIEBVIRUS3CVB3是誘發(fā)VMC的主要病原體可直接導(dǎo)致心肌細(xì)胞病變和死亡并激活內(nèi)源性阿片系統(tǒng)引起循環(huán)中Β內(nèi)啡肽ΒENDOGENOUSOPIOIDPEPTIDEΒEP水平升高及心肌細(xì)胞膜上ΒEP受體結(jié)合容量改變1通過神經(jīng)內(nèi)分泌免疫網(wǎng)絡(luò)激活核轉(zhuǎn)錄因子NUCLEARFACTKAPPABNFΚBCVB3還可通過TOLL樣受體4TOLLLIKERECEPT4TLR4激活TLR4NFΚB信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑激活NFΚB引起一系列的炎癥應(yīng)答造成心肌細(xì)胞進(jìn)一步損傷使VMC進(jìn)一步發(fā)展或出現(xiàn)充血性心力衰竭。因此研究藥物抑制CVB3在體內(nèi)的復(fù)制、降低ΒEP水平、抑制TLR4NFΚB信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑引起的炎癥反應(yīng)對VMC的治療作用不僅對闡明VMC的病理轉(zhuǎn)歸具有重要意義而且為發(fā)現(xiàn)和開發(fā)抗VMC的有效治療藥物提供新的治療思路。桂皮醛CINNAMALDEHYDECA是樟科植物肉桂CINAMONUMCASSIAPRESL的干皮及樹皮經(jīng)水蒸餾得到的揮發(fā)油肉桂油CINNAMAONOILOC的主要成分藥典規(guī)定其含量大于75％3。已有的藥理學(xué)研究表明CA具有抗真菌、抗病毒、抗腫瘤等作用46對中樞神經(jīng)系統(tǒng)CENTRALNERVOUSSYSTEMCNC以及免疫系統(tǒng)有一定的影響78。KHAYASHI等92007研究證實(shí)在體內(nèi)、外對流感APR8病毒具有抑制作用到2008年YOUNHS等10進(jìn)一步證實(shí)CA對體外LPS誘發(fā)TLR4NFΚB信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑具有顯著抑制作用。我們前期的研究證實(shí)11OC和CA對CVB3誘發(fā)性小鼠VMC具有明顯治療作用其治療效果優(yōu)于黃芪注射液和病毒唑并證明OC中抗VMC的藥理活性成分是CA。但是CA對CVB3誘發(fā)性VMC的作用機(jī)制尚不清楚由于CA的化學(xué)性質(zhì)不穩(wěn)定其在體內(nèi)可迅速被氧化為肉桂酸CINNAMICACIDCD其血漿半衰期為9MIN那么CA是通過其本身還是體內(nèi)代謝產(chǎn)物即CD對VMC發(fā)揮治療作用的也不明確。對此本課題就以CD為對照組從體內(nèi)外兩方面展開研究。研究目的首先探討CA、CD體內(nèi)、外抗CVB3的作用與作用機(jī)制；其次觀察CA、CD對CVB3誘發(fā)性VMC小鼠心肌細(xì)К水平以及TLR4NFΚB信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑等指標(biāo)的影響，評價(jià)CA治療VMC的作用機(jī)制。研究內(nèi)容第一部分體外實(shí)驗(yàn)1、CA和CD的細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)11方法培養(yǎng)原代心肌細(xì)胞，心肌細(xì)胞以1105孔接種于24孔板培養(yǎng)。待細(xì)胞生長成片后，加入0－1000ΜM含有CA、CD的培養(yǎng)液孵育72H。同時(shí)設(shè)置空白對照組，比較各組細(xì)胞病變效應(yīng)CYTOPATHICEFFECT，CPE、MTT法檢測細(xì)胞存活率N3。12結(jié)果CA對心肌細(xì)胞的LOGIC50為－4125。011000ΜMCA呈劑量依賴性抑制心肌細(xì)胞的活性，01，1，10，100ΜMCA對心肌細(xì)胞存活率分別為70％，54％，13％和0％。而1000ΜMCD對心肌細(xì)胞未見CPE，該劑量組的心肌細(xì)胞存活率為97％。011000ΜMCD的心肌細(xì)胞存活率明顯高于CA各組（P＜001）。13結(jié)論CA對心肌細(xì)胞的LOGIC50為－4125。大于01ΜM的CA對心肌細(xì)胞具有毒性；CD在0011000ΜM的濃度范圍未見細(xì)胞毒性。提示CA對心肌細(xì)胞具有顯著毒性，分析其毒性可能與其醛基相關(guān)。2、CA和CD體外抗CVB3的作用研究21方法心肌細(xì)胞以1105孔接種于24孔板培養(yǎng)。待細(xì)胞生長成片后，接種CVB3，孵育后1H給予0001、001、01、1、10、100、1000ΜMCA和CD，72H后觀察CPE，在HELA細(xì)胞上測定病毒滴度，設(shè)立CVB3病毒和空白對照組N3，確定量效關(guān)系。22結(jié)果10－1000ΜMCD各組呈劑量依賴性抑制心肌細(xì)胞中的病毒滴度（P＜001），細(xì)胞存活率高于CA各組和CVB組（P＜001）。100－1000ΜMCA組病毒滴度低于CVB組（P＜001），而細(xì)胞存活率與CVB組無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞001）。23結(jié)論101000ΜMCD可降低感染CVB3心肌細(xì)胞的病毒滴度，對心肌細(xì)胞具有保護(hù)作用；1001000ΜMCA在體外具有抗CVB3病毒的作用，但同時(shí)對宿主細(xì)胞也產(chǎn)生明顯毒性。3、CA和CD體外抗CVB3的作用機(jī)制研究31方法心肌細(xì)胞以1105孔接種于24孔板培養(yǎng)。細(xì)胞生長成片后，分別于接種CVB3前1H（－1H）、接種同時(shí)（0H）和接種后1H（1H）給予100ΜMCA、100ΜMCD各100ΜL，同時(shí)設(shè)CVB3及空白對照組；孵育72H，觀察CPE，MTT測定細(xì)胞存活率，并進(jìn)行病毒中和抗體、免疫熒光實(shí)驗(yàn)和電鏡觀察，探討各試藥的抗病毒作用機(jī)制。32結(jié)果接種CVB3－1H、0H和1H分別給予100ΜMCD100ΜL，其病毒滴度顯著低于CVB組（P＜001），細(xì)胞存活率高于CA組和CVB組（P＜001），三組不同接種時(shí)間CVB3的CD組之間，組間比較無顯著差異（P＞005），提示CD對CVB3感染無預(yù)防性保護(hù)作用，電鏡和免疫熒光實(shí)驗(yàn)顯示CD對CVB3有直接滅活和抑制病毒在細(xì)胞內(nèi)的復(fù)制作用。接種CVB301H給予CA，其病毒滴度低于CVB組（P＜001），但細(xì)胞存活率與CVB組無顯著性差異（P＞001）。33結(jié)論CA在體外可直接滅活CVB3，但對心肌細(xì)胞具有明顯毒性；CD可直接殺滅CVB3和抑制CVB3在細(xì)胞內(nèi)的復(fù)制，但對CVB3感染無預(yù)防作用。第二部分體內(nèi)實(shí)驗(yàn)部分1、VMC小鼠心肌組織中КMRNA和蛋白表達(dá)的變化11方法50只BALBC小鼠以10－509IUMLCVB3IP100ΜL誘導(dǎo)小鼠VMC模型，在隔離實(shí)驗(yàn)室飼養(yǎng)。另取15只BALBC小鼠同法接種100ΜL不含病毒的EAGLE液。分別在病毒感染后第5、7、14、21、28天，隨機(jī)取3只小鼠，處死，留取心肌組織。采用RTPCR和WESTERNBLOT技術(shù)檢測CVB3感染后各時(shí)間點(diǎn)小鼠心肌組織中ΚMRNA和蛋白質(zhì)的表達(dá)水平。12結(jié)果CVB3感染后第5、7、14、21天，ΚMRNA表達(dá)量顯著高于正常組（P＜001）；而Κ蛋白質(zhì)的表達(dá)量在CVB3感染后第7、14、21天明顯高于正常組（P＜005）。13結(jié)論首次發(fā)現(xiàn)CVB3誘導(dǎo)性VMC小鼠心肌細(xì)胞的Κ基因和蛋白質(zhì)水平明顯上調(diào)，提示Κ參與了VMC的病理過程。2、探討CA治療VMC小鼠的作用機(jī)制21方法150只BALBC小鼠分為5組（N30），100ΜL10－509IUMLCVB3IP誘導(dǎo)小鼠VMC模型，在隔離實(shí)驗(yàn)室飼養(yǎng)。另取16只BALBC小鼠作為對照組，接種100ΜL不含病毒的EAGLE液。于接種病毒后72H各組分別給藥，對照組IP2500MGKGNS；CVB3組IP2500MGKGNS；納絡(luò)酮（NXL）組IP2MGKG；U50，488H組IP30MGKG；CA組IP30MGKG；CD組IP30MGKG，連續(xù)給藥至21天。病毒感染后第10天N8和21天、各組隨機(jī)取小鼠稱體重，摘眼球取血后處死，取心臟，計(jì)算心臟重量體重比；心臟一分為二，一半用作ΚMRNA、CVB3MRNA、TLR4MRNA的RTPCR檢測和WESTERNBLOT技術(shù)檢測Κ和TLR4蛋白質(zhì)的表達(dá)水平；另一半作石蠟切片，HE染色和制片作NFΚB免疫組化染色；以ELASA試劑盒檢測血漿中ΒEP水平；整個(gè)實(shí)驗(yàn)期間觀察紀(jì)錄小鼠累積死亡數(shù)及存活時(shí)間。22結(jié)果與CVB3組比較，CA組與U50，488H組可顯著延長VMC小鼠中位生存時(shí)間，降低心臟指數(shù)；對CVB3感染后第10、21天的病理評分，ΚMRNA、TLR4MRNA和蛋白質(zhì)的表達(dá)水平均呈現(xiàn)抑制作用（P＜005001）；對感染21天血漿中ΒEP水平亦呈抑制作用。NXL組可延長VMC小鼠中位生存時(shí)間，降低感染后第10、21天血漿中ΒEP水平和第21天小鼠心肌病理病變（P＜005）。CD組對感染后第21天小鼠心肌病理病變較CVB3組明顯降低（P＜005）。CA組和CD組可顯著降低病毒感染后第10、21天CVB3MRNA表達(dá)（P＜001），且感染第14天CA組的病理評分輕于CD組；這提示CA的抗CVB3作用是通過其在體內(nèi)的代謝產(chǎn)物即CD產(chǎn)生的。23結(jié)論CA治療CVB3誘發(fā)性小鼠VMC可能的作用機(jī)制一是部分CA通過其體內(nèi)代謝產(chǎn)物CD發(fā)揮抗CVB3作用；二是CA可抑制TLR4NFΚB信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑從而抑制VMC小鼠心肌的炎癥反應(yīng)；三是CA對體內(nèi)Κ具有與U50，488H相同的活性作用，但其是否能通過Κ抑制VMC時(shí)心律失常尚需進(jìn)一步研究求證。

簡介：瀘州醫(yī)學(xué)院碩士學(xué)位論文EB病毒和P16基因甲基化在子宮頸鱗狀細(xì)胞癌和癌前病變中的表達(dá)及意義姓名劉秀華申請學(xué)位級別碩士專業(yè)病理學(xué)與病理生理學(xué)指導(dǎo)教師龍漢安20070401CPGCUSPFIGOSCAGECYTIDYLYLPHOSPHATEGUANOSINECYTOSINEURACILSTREPTAVIDINPEROXYDASEMETHODINTERNATIONALFEDERATIONOFGYNECOLOGYANDOBSTETRICSCLINICALSTAGEAGAROSEGELELECTROPHORESIS43磷酸胞苷?；B苷胞嘧啶尿嘧啶鏈霉親和素過氧化物酶染色法國際婦產(chǎn)科聯(lián)盟臨床分期瓊脂糖凝膠電泳

簡介：乙型肝炎病毒S基因編碼的HBSAG是乙肝疫苗的主要成分也是診斷HBV感染的重要依據(jù)抗HBS抗體可用來預(yù)防肝移植后HBV的再感染但有賴于HBSAG與抗HBS抗體之間的相互作用因此HBSAG抗原性的變化可直接影響HBV感染后的診斷和治療目前所知S基因突變發(fā)生率最高的部位是表面抗原中第145位氨基酸S基因NT587G→A的甘氨酸→精氨酸的突變G145R這種新的變異株可導(dǎo)致疫苗免疫失敗、抗HBS預(yù)防移植后HBV肝臟再感染和母嬰垂直傳播等給乙肝防治帶來了新的問題因此有必要開發(fā)針對這一變異株的疫苗以及對變異給HBV生物學(xué)性狀帶來的改變進(jìn)行深入的研究另外由于乙型肝炎病毒是嗜肝DNA病毒宿主范圍狹窄在自然情況下只能感染人和高等靈長類動物不能感染醫(yī)學(xué)科學(xué)研究中常用的實(shí)驗(yàn)哺乳動物如小鼠一類的嚙齒類動物并且體外細(xì)胞培養(yǎng)系統(tǒng)又只能進(jìn)行體外研究因而很大程度上限制了乙肝變異研究的深入我們構(gòu)建了HBVS基因NT587G→A變異株G145R的真核表達(dá)載體PCMVS2S145RPR并對其進(jìn)行酶切鑒定和DNA序列測定通過體外表達(dá)和免疫正常小鼠探討變異所致乙肝表面抗原免疫學(xué)性狀的改變

簡介：目的觀察單純、皰疹病毒性腦炎急性期、恢復(fù)期及對照組患者血液和腦脊液中的神經(jīng)元特異性烯醇化酶NSE及S100Β蛋白含量的變化，并探討其與腦電圖及頭顱MRI的相關(guān)性。方法21例單純皰疹病毒性腦炎住院患者為觀察組，篩選同期因頭痛而住院、有腰椎穿刺指征、后確診為神經(jīng)癥或偏頭痛患者共10例為對照組，采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)雙抗體夾心法，組內(nèi)比較采用單因素方差分析，組間比較采用配對資料T檢驗(yàn)以及皮爾遜PEARSON相關(guān)分析等方法進(jìn)行比較。P005。結(jié)論健康人血液及腦脊液中NSE及S100Β蛋白含量很少，當(dāng)感染單純皰疹病毒后，病毒經(jīng)血循環(huán)突破血腦屏障侵入中樞神經(jīng)系統(tǒng)。腦脊液或血液中的NSE及S100Β蛋白含量的高低雖然對單純皰疹病毒性腦炎的診斷不具有特異性，但其反映了神經(jīng)細(xì)胞和神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞的損害程度，是腦組織損傷后的特異性蛋白，也是腦組織破壞后較合適的生化標(biāo)記物。對監(jiān)測單純皰疹病毒性腦炎患者病情變化進(jìn)行療效觀察具有較大的價(jià)值和提供了重要參考。

簡介：本研究的目的確定我國安徽省阜陽市既往獻(xiàn)血人群中HIV1病毒流行株的亞型種類，分析該人群HIV1ENV、GAG、NEF礴基因的變異特征，探索這些特征與感染者所處的疾病不同階段的相關(guān)性和規(guī)律性。在本研究應(yīng)用巢式聚合酶鏈反應(yīng)NESTEDPCR對HIV1外膜蛋白ENV基因和核心蛋白GAG基因以及HIV1感染的長期不進(jìn)展者和緩慢進(jìn)展者的NEF基因進(jìn)行擴(kuò)增，獲得244名感染者病人ENV基因V3～C3及其鄰近區(qū)域序列、245名感染者病人GAG基因區(qū)序列以及49名感染者病人NEF基因區(qū)序列，應(yīng)用MEGA31、BIOEDIT、VECTNTISUITE8、ANTHEWIN等軟件進(jìn)行分析，同時(shí)結(jié)合患者的疾病進(jìn)展情況進(jìn)行相關(guān)性分析。系統(tǒng)進(jìn)化樹顯示245名患者體內(nèi)HIV病毒的ENV和GAG區(qū)序列均與泰國B亞型聚集在一起，未見重組現(xiàn)象，屬B’亞型感染者HIV1ENV和GAG區(qū)的組內(nèi)基因距離分別為911％和359％將感染者按CD4細(xì)胞計(jì)數(shù)和病毒載量水平分別進(jìn)行分層，可見隨CD4細(xì)胞計(jì)數(shù)降低，病毒載量水平的增加，各組基因距離呈增大的趨勢，且組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義PCOPIESML的為LTNP組；病毒載量的數(shù)量級為10COPIESML，稱為LTNP組；流行病學(xué)資料顯示，LTNP、LTNP和SP三組歷經(jīng)相同的感染時(shí)間，其NEF區(qū)基因序列呈散在分布，無成組聚集現(xiàn)象；SP組的組內(nèi)基因距離656±136％顯著大于LTNP組349±167％或LTNP組497±153％的組內(nèi)基因距離P、LTNP兩組之間組內(nèi)基因距離無顯著差異P032；三組氨基酸序列與我國早期流行于瑞麗的B’HIV1毒株相比，在第50、51位點(diǎn)均有兩個(gè)氨基酸的缺失；在LTNP，LTNP和SP三組的NEF區(qū)氨基酸序列中，TA所占比例依次呈顯著性降低的趨勢P00236，AA所占比例依次呈顯著性升高的趨勢P00091，K依次呈顯著性降低的趨勢P0037；三組NEF蛋白二級結(jié)構(gòu)的比對分析發(fā)現(xiàn)，三組NEF氨基酸序列的二級結(jié)構(gòu)元件螺旋、片層、轉(zhuǎn)角、卷曲的總數(shù)相同，但其定位和組合形式不盡相同，并呈現(xiàn)一定的規(guī)律性兩個(gè)LTNP組在第2025氨基酸處、5265氨基酸處相同，而不同于SP組；LTNP組與SP組在第110115氨基酸處相同，而不同于LTNP組。安徽省阜陽市既往獻(xiàn)血人群HIV1感染者體內(nèi)的病毒流行株以B’亞型為主要流行株。CD4和病毒載量作為疾病進(jìn)程不同階段的指標(biāo)，與病毒變異有相關(guān)性，即隨CD4降低、病毒載量升高，各組病毒的組內(nèi)基因距離顯著增大。HIVB’亞型V3環(huán)頂端四肽GPGQ出現(xiàn)在長期不進(jìn)展者頻率較高，而GPGR在進(jìn)展者常見。盡管NEF蛋白攜帶特征性序列，但三組NEF序列成交錯(cuò)混和分布，提示疾病進(jìn)展為非毒株特異性NEF蛋白氨基酸TA、K更多出現(xiàn)在LTNP中，而AA449更多出現(xiàn)在SP中，說明這一特征性氨基酸變異可能與疾病進(jìn)展相關(guān)；組內(nèi)基因距離比較的結(jié)果預(yù)示病毒變異的多樣性與疾病的進(jìn)展階段有一定聯(lián)系，可推測緩慢進(jìn)展者體內(nèi)毒株較長期不進(jìn)展者體內(nèi)毒株變異更快、多樣性更多；NEF蛋白二級結(jié)構(gòu)元件的定位及組合呈現(xiàn)出規(guī)律性的變化，該漸進(jìn)性的變化也反映了HIV1感染的疾病進(jìn)程是一個(gè)由量變到質(zhì)變的連續(xù)發(fā)展過程。

簡介：目的觀察HBVC蛋白在NK細(xì)胞中的表達(dá)及其對NK細(xì)胞功能的影響從而為乙型肝炎發(fā)病機(jī)制及防治的研究提供新的思路。方法構(gòu)建HBVC基因真核表達(dá)載體PHBICMVHBC經(jīng)雙酶切及測序鑒定證實(shí)該重組真核表達(dá)質(zhì)粒含有所需目的基因。然后通過脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法將其轉(zhuǎn)入NK92細(xì)胞48H后通過WESTERNBLOTTING檢測HBVC基因在NK92細(xì)胞中HBVC蛋白的表達(dá)情況然后通過MTT比色法檢測NK92細(xì)胞對HEPG2細(xì)胞的細(xì)胞毒作用用ELISA法檢測NK92細(xì)胞分泌的IFNΓ水平。結(jié)果經(jīng)酶切和測序鑒定證實(shí)所構(gòu)建PHBICMVHBC載體結(jié)構(gòu)正確目的片斷與GENEBANK中HBVC基因完全符合沒有發(fā)生突變。WESTERNBLOTTING結(jié)果表明PHBICMVHBC轉(zhuǎn)染NK92細(xì)胞后可在NK92細(xì)胞中表達(dá)大小約為21KDA的C蛋白并且可以和特異性抗HBC單克隆抗體結(jié)合。MTT比色法結(jié)果顯示與兩個(gè)對照組相比轉(zhuǎn)染了PHBICMVHBC的NK92細(xì)胞對于HEPG2細(xì)胞的細(xì)胞毒活性有所提高差異具有顯著性P結(jié)論1、PHBICMVHBC載體可以通過脂質(zhì)體法轉(zhuǎn)染到NK細(xì)胞中并且在其中成功表達(dá)。2、HBVC基因瞬時(shí)高表達(dá)使NK92細(xì)胞毒功能增強(qiáng)。3、HBVC基因瞬時(shí)高表達(dá)使NK92細(xì)胞分泌IFNΓ增加。

簡介：點(diǎn)擊查看更多乙型肝炎病毒表面抗原基因啟動子I DNA結(jié)合蛋白的篩選及SBP1的功能研究.pdf精彩內(nèi)容。

簡介：點(diǎn)擊查看更多高血糖致認(rèn)知功能障礙信號通路及阿司匹林、丹參素干預(yù)作用的研究.pdf精彩內(nèi)容。

簡介：點(diǎn)擊查看更多含突變?nèi)艘葝u素原基因質(zhì)粒的包裝及病毒滴度測定.pdf精彩內(nèi)容。

簡介：近年來，世界各地?？?0型腸道病毒ECHOVIRUS30，ECH030相關(guān)疾病暴發(fā)逐漸增多，我國也連續(xù)有多起暴發(fā)報(bào)道。2003年1月至7月，在我國江蘇省北部地區(qū)發(fā)生的較大規(guī)模的兒童無菌性性腦膜炎暴發(fā)流行中，本課題組從患者腦脊液中分離到了ECHO30病毒，首次明確本次感染的病原，并對該病毒的生物學(xué)特性進(jìn)行了相關(guān)探討。本研究在此基礎(chǔ)上，依次建立了ECHO30國內(nèi)流行株血清特異性IGG抗體的間接免疫熒光試驗(yàn)IFA和酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)ELISA檢測方法。并初步用于了解人群的ECHO30型無菌性腦膜炎隱性感染情況調(diào)查。在IFA技術(shù)建立過程中，我們使用細(xì)胞爬片法，用分離得到的毒株感染人胚肺二倍體細(xì)胞MRC5制備抗原片，優(yōu)化了IFA染色程序，確定1100和1200兩個(gè)血清稀釋度，1200的異硫氰酸熒光素FITC標(biāo)記的兔抗人及抗鼠IGG稀釋度及伊文氏蘭襯染為最佳染色條件。用建立的IFA技術(shù)篩檢了71份非暴發(fā)地區(qū)兒童血清，其中得到12份為陽性，59份為陰性；47份暴發(fā)地區(qū)兒童血清中，22份為陽性，25份為陰性。研究發(fā)現(xiàn)人群中存在ECHO30型無菌性腦膜炎隱性感染者。所建立的IFA技術(shù)有較好的靈敏度，可初步用于小范圍人群的血清學(xué)檢測，但并不適用于大面積人群的血清流行病學(xué)調(diào)查。因此，本研究進(jìn)一步探討了ECHO30IGG抗體的間接ELISA檢測方法。研究使用分離得到的ECHO30病毒株全病毒作為ELISA反應(yīng)體系的抗原，用棋盤滴定法確定ELISA檢測最佳條件，據(jù)陰性樣品OD值分布情況確定CUTOFF值，建立反應(yīng)體系。結(jié)果確定ELISA反應(yīng)的最佳抗原包被濃度為25ΜGML，血清檢測最佳稀釋度為1200，HRP羊抗人IGG理想稀釋度為15000，CUTOFF值定為0291。研究對ELISA檢測結(jié)果和IFA檢測結(jié)果做了比較，并以IFA為標(biāo)準(zhǔn)對ELISA的靈敏度和特異度進(jìn)行了評價(jià)。結(jié)果確定ELISA檢測結(jié)果與IFA結(jié)果一致率達(dá)891％，一致性檢驗(yàn)KAPPA值為0742，ELISA的靈敏度和特異度分別為818％和92％。提示兩種檢測方法在可信度上差別不大，均可用于檢測血清抗體，但根據(jù)兩種技術(shù)的操作特點(diǎn)，ELISA技術(shù)更適用于大面積人群的血清流行病學(xué)調(diào)杳。為了了解人群ECHO30國內(nèi)流行株引起的無菌性腦膜炎隱性感染情況及保護(hù)性分布情況，探索ECHO30病毒感染的危險(xiǎn)因素，我們使用所建立的ELISA方法，對來自上海市不同年齡的412名健康人和來自浙江省德清縣的289名成人健康體檢者血清進(jìn)行了ECHO30IGG抗體檢測，并進(jìn)行了相應(yīng)比較分析。通過對上海市區(qū)人群的分析發(fā)現(xiàn)1歲以下嬰幼兒中未見抗體陽性者，15歲以下兒童抗體陽性率較低10％～167％，15歲以上人群抗體陽性率水平明顯升高450％～467％。孕婦與普通人群抗體陽性率無顯著性差異。提示上海市人群中存在隱性感染者，人群通過自然感染獲得免疫保護(hù)，15歲以下兒童為ECHO30感染及發(fā)病的高危人群，母體傳遞給嬰幼兒的抗體水平較低，不能為嬰幼兒提供先天性免疫保護(hù)。對浙江農(nóng)村人群的分析發(fā)現(xiàn)浙江農(nóng)村成人的隱性感染情況和上海人群基本相似。在這部分調(diào)查中，我們對ECHO30病毒感染的危險(xiǎn)因素進(jìn)行了單因素和多因素分析，遺憾的是，并未發(fā)現(xiàn)有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的危險(xiǎn)因素。目前，我國尚缺乏常規(guī)的腸道病毒監(jiān)測系統(tǒng)，ECHO30信息資料嚴(yán)重不足，我們對引起多次腦膜炎暴發(fā)的ECHO30具體傳播途徑尚不清楚。根據(jù)本研究的結(jié)果，我們推測ECHO30病毒的一般感染可能和兒童時(shí)期的特殊行為習(xí)慣有關(guān)。如果出現(xiàn)某種特別的危險(xiǎn)因素，使ECHO30病毒有更多的機(jī)會接觸缺乏保護(hù)性抗體的兒童，就可能引起無菌性腦膜炎的暴發(fā)。因此在以后的研究中，需要進(jìn)一步改善血清學(xué)調(diào)查技術(shù)，開展更大范圍的血清流行病學(xué)調(diào)查工作，結(jié)合現(xiàn)場流行病學(xué)工作和相關(guān)病毒信息，完善病毒監(jiān)測體系，繼續(xù)探索病毒在人間傳播的關(guān)鍵環(huán)節(jié)，從而為疾病控制工作提供更為精確的理論指導(dǎo)。

簡介：遵義醫(yī)學(xué)院碩士學(xué)位論文516名婦女宮頸人乳頭狀瘤病毒（16、18型）感染調(diào)查姓名楊譽(yù)佳申請學(xué)位級別碩士專業(yè)婦科腫瘤指導(dǎo)教師孫麗君20070501遵義醫(yī)學(xué)院2007屆焉士研究生畢業(yè)論文516名婦女宮頸人乳頭狀瘤病毒16、18型感染調(diào)查【奢要】目的了解遵義市部分婦女富頸人乳頭狀瘤病毒HUMANPAPNLOMAVIRES，HPVL6、IS感染的主要類型、年齡分布、痘染狀況。為下一步對本地人群實(shí)施調(diào)查提供行之有效的方案．方法采用第二代雜交捕獲試驗(yàn)HY耐DCAPTUREII,HCII檢測2005年4月至2006年LO月我院婦科病房及門診112例正常富頸、237例慢性宮頸炎、蛇例宮頸上皮內(nèi)瘤樣病變CERVICALINTRAEPITL壕LIALNEOPLASIA,CINI、34例CINIIⅢ以及41例宮頸癌INVASIVECARCINOMAOFCERVIX,ICC病例中高危型HPV06、LS的表達(dá)．結(jié)果1．高危HPV感染與CINIIⅢ及ICC關(guān)系密切，正常宮頸、慢性宮頸炎及CINI組織中高危HPV表達(dá)率明顯低于CINII皿及ICC，有顯著性差異P妯．05．2．正常人群中年輕的性活躍婦女HPV感染率高P∞．05．3．本市婦女HPVL6型感染率較HPVL8型高P如．05．結(jié)論1．女性生殖道高危塑ITPV感染是富頸癌及CIN發(fā)病的主要危險(xiǎn)因素之一，提示宮頸癌的防治重點(diǎn)應(yīng)放在防止HPV感染和對HPV感染的篩查以及密切監(jiān)測已感染高危型HPV人群．幺檢測高危HPV是早期診斷C蹦ⅡRⅢ及LCC的一個(gè)重要輔助方法，有望在我地區(qū)進(jìn)一步進(jìn)行大樣本量的檢測．【關(guān)鍵詞L宮頸{人乳頭狀瘤病毒；感染