簡介：分類號B84密級無學校代碼10414學號2012320011專業(yè)學位碩士研究生學位論文專業(yè)學位碩士研究生學位論文認知診斷項目擬合檢驗及其應用認知診斷項目擬合檢驗及其應用GOODNESSGOODNESSOFOFFITITEMTESTITSFITITEMTESTITSAPPLICATIONUNDERCOGNITIVEAPPLICATIONUNDERCOGNITIVEDIAGNOSISFRAMEWKDIAGNOSISFRAMEWK譚輝曄譚輝曄院所心理學院導師姓名蔡艷專業(yè)學位類別應用心理碩士專業(yè)領域二○一五年五月I摘要認知診斷測驗是知識或技能密集型測驗，它關注并反饋被試內部心理加工過程，要獲取有效、準確的診斷結果，繼而發(fā)揮其精細診斷并反饋的優(yōu)勢，其中很重要的一點就是必須確保模型與數(shù)據(jù)擬合。本文本著為認知診斷研究及應用者提供借鑒及方法學支持的目的，就認知診斷模型資料擬合檢驗中的項目擬合檢驗統(tǒng)計量進行了三方面研究研究一主要探討常用的項目反應理論擬合檢驗統(tǒng)計量在認知診斷領域中的可行性及偵查效果；在研究一的基礎上，研究二通過蒙特卡洛模擬系統(tǒng)比較這些項目擬合檢驗統(tǒng)計量在不同被試人數(shù)、測驗長度、屬性數(shù)目等因素下的偵測效果；隨后，研究三考察了這些項目擬合檢驗統(tǒng)計量在實際情景中的應用。結果發(fā)現(xiàn)1項目反應理論中常用的2、2G、2M、EQD、EQGD統(tǒng)計量的I類錯誤率和II類錯誤率均小于5，這表明這些指標能夠有效偵測項目失擬，在認知診斷領域中是可行的。2就各指標在兩類錯誤上的具體表現(xiàn)而言I類錯誤率從小到大依次為EQDEQGD22G2M；II類錯誤率從小到大依次為22G2MEQDEQGD。32、2G、2M、EQD和EQGD統(tǒng)計量的偵查效果會受到被試人數(shù)、測驗長度、認知屬性個數(shù)等因素的影響。其中，被試人數(shù)與2、2G、EQD和EQGD的I類錯誤率呈正比，與EQD和EQGD的II類錯誤率呈反比；增加測驗長度有助于降低五種指標的I類錯誤率，但對II類錯誤率影響不大；隨屬性數(shù)目的增加，EQD和EQGD的I類錯誤率下降，但II類錯誤率上升，2和2G的兩類錯誤率均呈現(xiàn)下降趨勢。4當測驗項目的屬性被錯誤標定時，2、2G、2M、EQD和EQGD均能有效測查出失擬項目。其中，2M測查效果最好，其次為EQD和EQGD，2和2G的測查效果相對較差。

簡介：目的本研究對蒙特利爾認知評估量表MOCA中文版進行初步臨床研究，主要觀察其在國內應用于篩查中度以上認知功能障礙患者的效度、信度及敏感度，為其在國內的臨床應用提供客觀依據(jù)。目前國內未見相關臨床研究報導。方法以王煒等的中文版為藍本，選取2007年6月2007年12月在重慶醫(yī)科大學附屬第二醫(yī)院康復科和神經內科住院的腦部疾病患者、非腦部疾病患者及陪護人員52例，分為2組對象進行測試。其中病例組N22為腦部疾病患者，同時伴有記憶減退主訴且MMSE初篩≤23分者視為中度以上認知功能障礙，男12例，女10例，年齡543±155歲。對照組N30為非腦部疾病的住院患者和陪護人員，男13例，女17例，年齡486±135歲。兩組患者年齡與教育程度相當。分別用MOCA和MMSE評定2組對象。將MOCA結果與MMSE結果作相關性檢驗，驗證MOCA中文版的效度；對MOCA作2名評定員之間的相關性分析ICC，檢驗其重復測試信度；對2組評定對象之間MOCA的結果進行MANNWHITNEY檢驗，測試其敏感度。結果MOCA和MMSE評定結果高度相關R0902，P＜0001。MOCA各項內容測試2名評定員之間ICC0913～1000。病例組和對照組的MOCA總分分別為1182±423和262±264分，兩者間差異有顯著性意義P＜001。結論MOCA中文版具有良好的效度、信度和敏感度，可用于國內中度以上認知功能障礙患者的初篩；同時需進一步修改完善命名及抽象子項目，以適應國內的文化背景。

簡介：流感病毒INFLUENZAVIRUS是引起人類呼吸道感染及引起人類死亡的主要病因之一。人類曾多次遭受過流感病毒大流行1918年H1N1亞型，1957年H2N2亞型，1968年H3N2亞型，1977年H1N1亞型。至今人類仍然無法征服流感病毒?？焖贆z測及接種疫苗被認為是控制并清除流感病毒經濟有效的手段。實時熒光定量PCR檢測流感病毒具有快速、特異性高的特點，但花費昂貴，不適合大面積推廣；當前使用的疫苗有流感減毒疫苗、滅活疫苗、裂解疫苗等，這些疫苗能夠在人體中產生保護性抗體，但是都有一定的缺陷，如減毒疫苗具有毒力回復的潛在性危險，而后兩種卻很難產生細胞免疫應答。因此，迫切需要研制一種快速的檢測流感病毒的方法及新型有效的疫苗。當前發(fā)表的許多文章都證實了流感病毒糖蛋白抗原的保護性作用，在這些糖蛋白抗原中，血凝素HA的作用相當重要。HA具有免疫原性，抗血凝素抗體可以中和流感病毒，是主要的保護性抗原。因此，針對HA蛋白的重要性，以GENBANK公布的ACALIFNIA052009H1N1流感病毒HA基因為目的基因，從GENBANK數(shù)據(jù)庫中下載HA基因序列，進行全基因合成，將人工合成的甲型H1N1流感病毒的HA基因克隆到原核表達載體PET30A上，構建重組表達質粒，并轉化ECOLIBL21DE3，以IPTG對重組菌BL21DE3PETHA進行誘導表達，表達產物HISHA融合蛋白通過變復性后純化。WESTERNBLOT試驗結果表明表達產物HISHA融合蛋白能特異性地與人甲型H1N1流感患者陽性血清反應，證明表達產物HISHA融合蛋白具有免疫反應活性。利用該HISHA融合蛋白的建立檢測抗體的ELISA方法，并探究ELISA方法的最適宜條件，ELISA方法的適宜條件為原核表達產物HISHA融合蛋白以1ΜG孔包板，檢測血清的稀釋度為180到1640間；以建立的ELISA檢測300份人源血清樣品，陽性血清數(shù)量為74份，陽性率為2467％，并與商品化試劑盒進行對比，符合率為9865％，對比試驗說明建立的ELISA方法具有可行性。將人工合成的甲型H1N1流感病毒的HA基因克隆到PFASTBAC1轉移載體，轉化DH5A，然后在含KAN抗生素的LB平板上挑取陽性菌落，得到的重組轉移質粒PFASTBACHA，再提取陽性克隆質粒轉化到含桿狀病毒穿梭載體BAC的受體菌ECOLIDH10BAC中，發(fā)生轉座作用，在含慶大霉素、卡那霉素、四環(huán)素3種抗生素和XGALIPTG的LB培養(yǎng)板上，篩選出白色菌落得到重組穿梭載體BACHA。經PCR鑒定為陽性后，采用陽離子脂質體法轉染到SF9昆蟲細胞獲得重組桿狀病毒，通過IFA、SDSPAGE及WESTERNBLOT試驗證實在SF9細胞中HA蛋白得到表達。血凝試驗結果表明表達產物HA蛋白血凝價為116，血凝試驗證實真核表達產物具有生物活性。將真核表達的HA蛋白以100ΜG只的劑量，通過皮下注射BALBC小鼠，探討其免疫原性，ELISA檢測免疫小鼠血清的抗體效價，結果顯示，二免14天，HA蛋白免疫組的抗體效價與空白對照組之間呈現(xiàn)顯著差異P005。HA蛋白免疫小鼠血清血凝抑制試驗血凝抑制價為116。ELISPOT檢測免疫小鼠分泌細胞因子IL4和IFNΓ脾臟淋巴細胞，結果顯示產生IFNΓ的分泌細胞少于產生IL4的分泌細胞，PRISM軟件包分析表明，兩者存在顯著差異P005，免疫小鼠體內趨向于TH2為主的免疫應答。

簡介：目的探討中藥玉屏風散防治小鼠單皰病毒性角膜炎HERPETICSIMPLEXKEMTITIS，HSK的作用機制。方法BALBC小鼠60只按隨機數(shù)字表隨機分為健康對照組、治療組和模型組。采用角膜劃痕法將I型單純皰疹病毒HERPESSIMPLESVIRUSTYPE1HSV1接種于治療組和模型組40只BALBC小鼠角膜建立小鼠單純皰疹病毒性角膜炎HSK模型。治療組予以玉屏風散水煎液灌胃模型組予以生理鹽水灌胃；健康對照組只做角膜劃痕，相同室內環(huán)境下自由飲食飲水。建模后第1、3、5、7、14天比較觀察三組的發(fā)病情況、死亡率及臨床特征，并于第14天采用雙抗體夾心法酶聯(lián)免疫吸附實驗ELISA檢測三組小鼠血清中自細胞介素2IL2、白細胞介素4IL4和Γ干擾素IFNΓ水平。結果模型組及治療組小鼠均感染HSV1發(fā)病，玉屏風散治療組小鼠病死率為15％，模型組病死率為1667％，兩組死亡率統(tǒng)計學上無顯著差異，顯示玉屏風散不影響HSK的死亡率。ELISA檢測結果顯示模型組小鼠血清中IL4水平較健康對照組顯著增高P001；IL2、IFNΓ水平較健康對照組顯著降低P005。玉屏風散治療組小鼠治療后，血清IL4水平較模型組顯著降低P001，而IL2、IFNΓ水平顯著增加P005。結論HSV1感染小鼠角膜后可導致血清IL4明顯升高，IL2、IFNΓ明顯降低，玉屏風散治療HSK小鼠后血清IL4降低，IL2、IFNΓ水平升高，恢復了TH1TH2細胞因子的平衡，減輕病損，促進疾病早期愈合，并減少復發(fā)。

簡介：復旦態(tài)堂盟堂焦途塞慢病毒介導SMAD7基因對角膜增殖與纖維化的抑制作用STUDYOILLENTIVIRALMEDIATEDSMAD7GENEINTERFERENCEAGAINSTCORNEALSTROMALPROLIFERATIONANDFIBROSIS復旦大學附屬眼耳鼻喉科醫(yī)院專業(yè)眼科學博士研究生王惕導師褚仁遠教授導師組成員周行濤教授瞿小妹教授戴錦暉教授20LO年4月中文摘要英文摘要英文縮略詞表目錄第一部分大鼠SMAD7基因慢病毒載體的構建與鑒定第二部分體外SMAD7慢病毒對角膜基質細胞增殖與纖維化的抑制作用第三部分體內SMAD7慢病毒對角膜增殖與纖維化的抑制作用全文結論全文參考文獻綜述致謝46173748089589

簡介：浙江大學醫(yī)學院博士學位論文腺病毒介導的BCLXLSHRNA治療結腸癌的研究姓名朱洪波申請學位級別博士專業(yè)腫瘤學指導教師何超20080405

簡介：近年來，手足口病在世界多個地區(qū)，尤其是亞洲爆發(fā)并流行，且其感染和死亡率逐年增高，危害十分嚴重。腸道病毒71ENTEROVIRUS71，EV71是手足口病H，F(xiàn)OOT，MOUTHDISEASE，HFMD的主要病原體，以感染嬰幼兒為主，其感染常伴隨神經系統(tǒng)并發(fā)癥，嚴重可導致兒童死亡。因此，EV71的分子生物學研究，預防及治療EV71感染的藥物開發(fā)，已成為當前病毒學研究領域的熱點。MIRNAS是在真核生物中發(fā)現(xiàn)的一類內源性長度約為22個核苷酸單鏈非編碼RNA，通過降解靶MRNA分子或抑制靶基因MRNA的翻譯，參與轉錄后基因表達的調控過程。已經證實MIRNAS在很多生物學過程中起著重要的作用，越來越多的研究表明MIRNAS還參與調控病毒在宿主細胞內的感染和復制過程，本文對MIRNAS在宿主細胞內調控EV71病毒的復制的作用進行了研究。首先構建了MIRNAS靶基因篩選系統(tǒng)。我們在LUCIFERASE雙檢測體系的PMIR載體插入待檢基因，如果插入的基因序列能被細胞內的MIRNAS靶向調控，報告基因的表達將發(fā)生變化。通過實驗，我們發(fā)現(xiàn)插入EV71病毒5’UTR基因的PMIR載體，報告基因的表達下降了25倍左右。進一步將5’UTR基因打斷成260BP左右的片段，同樣進行檢測，發(fā)現(xiàn)5’UTR11270片段使LUCIFERASE的表達下降了25倍左右，所以推測5’UTR1片段可能是MIRNAS的作用靶標。隨后我們利用在線分析軟件，預測可能作用于5’UTR1基因片段的MIRNAS，選擇其中的MIR373和MIR5425P合成MINICS，檢測MIRNAS對5’UTR1基因片段的作用，結果顯示，二者都可以下調報告基因的表達。但MIRNAS分子對5’UTR1基因的調控作用是否可以體現(xiàn)在EV71病毒的復制過程中為此，我們選擇了MIR373和MIR5425P做了進一步研究。我們在RD細胞中轉染MIRNASMINICS，6H后感染EV71病毒。利用WESTERNBLOT和REALTIMEPCR實驗檢驗病毒的復制情況。結果顯示，MIR373和MIR5425P可以抑制EV71病毒在RD細胞中的復制。但是MIR373和MIR5425P的具體作用機制還有待進一步研究。本論文的另一部分內容是進行抗EV7L病毒復制的先導化合物的篩選。新藥的發(fā)現(xiàn)路徑大致為化合物庫的合成和靶的開發(fā)，高通量的篩選，選出有希望的先導化合物，接下來進行先導化合物的最優(yōu)化，臨床實驗直到新藥的上市。本實驗由武漢大學提供6種化學合成的醫(yī)藥中間體，3，4二甲氧基苯甲酸甲酯METHYL3，4DIMETHOXYBENZOATE，3，4二甲氧基苯乙酸甲酯METHYL3，4DIMETHOXYPHENYLACETATE，D對羥基苯甘氨酸甲酯METHYLD4HYDROXYPHENYLGLYCINATE，4氯苯甘氨酸R4CHLOPHENYLGLYCINE，3，4二羥基苯乙酸甲酯METHYL3，4DIHYDROXYPHENYLACETATATE，4氯2異丙基5甲苯酚4CHLO5METHYL21METHYLETHYLPHENOL以及2種五肽化合物P010157和首先通過WESTERNBLOT進行篩選，發(fā)現(xiàn)3，4二羥基苯乙酸甲酯對EV71在RD細胞中的復制具有明顯的抑制效果。接下來利用MTT法初步檢測3，4二羥基苯乙酸甲酯的細胞毒性，結果表明CC50為00726ΜGΜL，細胞毒性較低。REALTIMEPCR檢驗3，4二羥基苯乙酸甲酯對EV71病毒復制的影響，當終濃度為001ΜGΜL時對EV71病毒復制的抑制率為7683±247％。以上結果表明3，4二羥基苯乙酸甲酯對EV71病毒在RD細胞中的復制具有抑制作用。感染EV71病毒的一日齡ICR乳鼠注射3，4二羥基苯乙酸甲酯，生長狀態(tài)明顯好于陽性對照組，REALTIMEPCR檢測3，4二羥基苯乙酸甲酯對EV71病毒在乳鼠體內的復制具有很好的抑制效果。以上結果證明3，4二羥基苯乙酸甲酯是一種具有開發(fā)潛力的抗EV71病毒復制藥物，但具體的作用機制還有待進一步研究，并且還需要根據(jù)EV71病毒的基因組特點，優(yōu)化3，4二羥基苯乙酸甲酯的結構，合成效果更好的衍生物。采用同樣的思路對比2種五肽化合物的實驗結果，WESTERNBLOT發(fā)現(xiàn)P010157能夠抑制EV71病毒在RD細胞中的復制，CC50大約可達到1557378ΜGΜL。REALTIMEPCR結果顯示，當P010157終濃度為01ΜGΜL時對EV71病毒復制的抑制率為9184±204％。以上結果說明P010157具有很好的開發(fā)價值。本文從MIRNAS和小分子化合物兩方面研究了它們對EV71病毒在宿主細胞中復制的調控作用，有了初步的研究結果，為利用MIRNAS和小分子化合物抑制EV71病毒復制的相關研究提供了有價值的參考。

簡介：暨南大學暨南大學碩士學位論文士學位論文題名（中英對照）慢性腦缺血導致血管重塑、血流動力學變化、神經元變性和認知功能損傷CHRONICCEREBRALHYPOPERFUSIONINDUCESVASCULARPLASTICITYANDHEMODYNAMICSBUTALSONEURONALDEGENERATIONANDCOGNITIVEIMPAIRMENT作者姓名井珍指導教師姓名黃立安，阮奕文及學位、職稱博士主任醫(yī)師，教授學科、專業(yè)名稱神經病學學位類型專業(yè)學位論文提交日期2015年4月15日論文答辯日期2015年6月1日答辯委員會主席曾進勝教授論文評閱人學位授予單位和日期I中文摘要中文摘要目的探究慢性腦缺血大鼠在缺血前后動態(tài)血流變化、血管新生、細胞形態(tài)學變化以及認知功能改變。方法采用分步雙側頸總動脈結扎法制作慢性腦缺血模型。缺血前后分別用3DASL技術測定雙側頂葉皮層、紋狀體和小腦區(qū)域腦血流（CBF）值；MRA顯示大鼠腦大動脈系統(tǒng)及測量椎動脈直徑和面積；HE染色觀察小腦顆粒細胞在慢性腦缺血前后變化情況；CD34、IBA1和GFAP免疫熒光染色觀察微血管、小膠質細胞和星形膠質細胞變化情況；水迷宮評估大鼠慢性腦缺血前后認知功能改變。結果皮層、紋狀體和小腦部位的CBF值在右側頸總動脈結扎（RCCAO）后即出現(xiàn)明顯下降，一直維持到缺血后2WK，然而在缺血后3WK6WK恢復至基態(tài)水平。椎動脈在雙側頸總動脈結扎后開始擴張直到缺血后6WK。微血管數(shù)量在缺血后2WK4WK呈下降狀態(tài)，而6WK呈上升狀態(tài)。皮層、紋狀體部位神經元變性發(fā)生在缺血后的2WK6WK，但膠質細胞數(shù)量在缺血后4WK見明顯增加。缺血前后小腦顆粒細胞層厚度無明顯變化。水迷宮結果表明缺血時間越長，大鼠的認知功能越差。結論慢性腦缺血可引起代償機制以維持正常腦血流灌注，然而這種代償還不足以阻止缺血引起的神經元變性和認知功能損傷。關鍵詞雙側頸總動脈結扎；腦血流；椎動脈；血管新生；神經元變性

簡介：沖突監(jiān)測理論是當前解釋沖突干擾效應產生機制的主要觀點，而這一理論最重要的經驗性證據(jù)即是一致性順序效應CONGRUENCYSEQUENCEEFFECT，簡稱CSE，即不一致試次INCONGRUENTTRAIL，如SSHSS之后的沖突效應不一致試次的反應時減去一致試次的反應時顯著地小于一致試次CONGRUENTTRAIL，如SSSSS后的沖突效應。先前的研究在明確了一致性順序效應的存在后，為了對此效應做了更加深入的探索，有研究者對沖突所引起的控制范圍進行了思考這種控制究竟是局部的還是整體的假設實驗中包含了一個以上的任務類型，若控制是整體的，那么不管當前進行的是何種任務，監(jiān)測到的任意的沖突信號即不論是哪一種任務中的沖突將被傳送到所有活躍的任務表征，從而引起認知控制。這樣的過程是非常高效的，因為只要監(jiān)測到任意的沖突，就可以對所有的任務進行調節(jié)。若控制是局部的，那么在監(jiān)測到某種沖突后，認知系統(tǒng)則僅對監(jiān)測到沖突的這一個任務進行調節(jié)，而不影響其他任務。這是由于沖突監(jiān)測系統(tǒng)不僅是對沖突進行監(jiān)測，同時也對沖突的來源進行識別。近來，一些行為研究采用不同的任務范式考查了沖突控制的范圍。然而，對于沖突引發(fā)的認知控制究竟是局部的還是整體的這一問題，在前人的研究中還存在激烈的爭論。本研究發(fā)現(xiàn)，已有采用整合交叉任務范式來探索認知控制范圍的研究其刺激反應集均為2，這樣將無法去除特征整合的作用，從而對一致性順序效應造成影響。為了更加系統(tǒng)地對沖突引發(fā)的認知控制的范圍進行了探索，本研究將同時考慮刺激反應集大小和任務類型兩個因素。實驗一采用刺激反應集為2的FLANKER任務與SIMON任務整合的交叉任務范式，其結果表明一致性順序效應既存在于任務內，又存在于任務間，即認知系統(tǒng)的控制是整體的。實驗二采用刺激反應集為2的STROOP任務與SIMON任務整合的交叉任務范式，結果表明，一致性順序效應僅存在于任務內，不存在于任務間，即認知系統(tǒng)的控制是局部的。為了去除特征整合的影響，實驗三和實驗四分別采用FLANKER任務與SIMON任務整合，STROOP任務與SIMON任務整合的交叉任務范式，將刺激反應集增加到4，結果均表明一致性順序效應僅存在于任務內，不存在于任務間，支持認知系統(tǒng)的控制是局部的這一觀點即不同類型的沖突其認知控制的過程是相互獨立且平行存在的。由于沖突監(jiān)測理論并未對沖突引發(fā)的控制過程做詳細的論述，因此，本研究結果是對沖突監(jiān)測理論的擴展。再加之沖突監(jiān)測理論被認為是對認知控制機制的解釋較有影響力的理論，因此，當前的研究對于認知控制機制的探索有一定的理論意義。此外，本研究系統(tǒng)地對沖突引發(fā)的認知控制的范圍進行了探索，并且提出在這一研究中去除特征整合效應的重要性，對于采用此范式研究中存在的分歧具有一定的參考價值。

簡介：背景與目的丙型肝炎病毒是一條有包膜的單股正鏈RNA病毒，屬于丙型肝炎病毒屬黃病毒科，是丙型肝炎的主要病原體。慢性感染常常演變成肝硬化和肝細胞癌。目前尚無針對HCV的預防或治療性疫苗，較為認可的治療方案是干擾素聯(lián)合應用利巴韋林，但治療的病毒學應答率僅在50％左右。因此，尋找更為安全有效的抗HCV治療方法已成為迫在眉睫的問題。HCV基因治療方法己成為近幾年來的研究熱點，分子技術如反義核酸以及RNA干擾技術在基礎和臨床研究方面己取得了一些進展。為探討反義核酸對HCV的作用，本研究構建重組HCV復制子真核表達質粒PHCVEGFP并在HUH7細胞中復制表達，再通過反義EGFP轉染觀察其對HCV復制的影響，為尋找新的抗HCV方法提供有效平臺和實驗依據(jù)。方法1用增強型綠色熒光蛋白EGFP基因替代HCV基因組中的包膜基因（E1和E2），體外構建重組HCV復制子真核表達質粒PHCVEGFP經限制性內切酶酶切分析和測序結果證明重組HCV復制子中未發(fā)生EGFP和HCV編碼區(qū)讀碼框架改變。2脂質體介導轉染人肝癌細胞系HUH7細胞，熒光顯微鏡觀察和半定量RTPCR方法證實該重組HCV復制子在HUH7真核細胞中能有效復制并表達EGFP蛋白。3以人肝癌HUH7細胞株為研究對象，脂質體介導將PHCVEGFP和反義EGFP質粒共轉染HUH7細胞，同時設三組對照組正義EGFP和HCVEGFP復制子質粒、HCVEGFP復制子質粒、未轉染質粒的空白對照，熒光顯微鏡和WESTERNBLOT檢測EGFP蛋白表達，半定量RTPCR檢測HCVRNA的復制情況。結果1酶切和測序證明正確構建了重組真核表達質粒HCVEGFP，并證實該質粒能在HUH7真核細胞中正確表達和有效復制。（2反義EGFP質粒轉染組的EGFP蛋白表達較對照組明顯下調，HCVRNA的復制較對照組顯著減少P結論1成功構建了HCVEGFP的真核表達質粒載體，并在HUH7細胞中表達，為在HUH7細胞模型中進一步研究HCV的復制和致病機制提供了有效技術平臺。2反義EGFP能抑制HCV的復制和蛋白表達，為探索抗HCV治療提供了可行性和實驗依據(jù)。

簡介：蘇州大學碩士學位論文基于ERP技術的說謊認知研究姓名連紅杰申請學位級別碩士專業(yè)發(fā)展與教育心理學指導教師何華20090401ARESEARCHOFLYINGCOGNITIONWITHEVENTRELATEDPOTENTIALTECHNOLOGYABSTRACTARESEARCHOFLYINGCOGNITIONWITHEVENTRELATEDPOTENTIALTECHNOLOGYABSTRACTINORDERTOSTUDYHOWRTRESPONSETIMEANDACACCURACYCANDIFFERENTIATETHEDIFFERENCESBETWEENLIEANDTRUEBYEXPERIMENTMETHOD；TOCOMPAREHOWPICTURE，SENTENCEANDWORDRESULTINTHEDIFFERENCEOFBEHAVIORALANDERPSRESULTSWHICHAREACTIVATEDBYLIEANDTRUETASK；TOEXPLOERWHICHPARTOFCEREBRATAKESPARTINTHELYINGPROCESSING，ANDTOSUPPLYEXPERIMENTDATASFOREXPLAININGWHATISTHELYINGPROCESSINGTHEPRESENTSTUDIESISWITHINSUBJECTSDESIGN，F(xiàn)IFTEENUNDERGRADUATEVOLUNTEERSTAKEPARTINOUREXPERIMENTSANDPERFORMASERIESOFSTROOPLIKETASK，THENALLTHEDATASARECOMPUTEDBYREPEATEDMEASURESANOVASINORDERTOCOMPARETHEBEHAVIORALANDERPSEVENTRELATEDPOTENTIALSDATASOFLIEWITHTHATOFTRUEBETWEENPICTURE，SENTENCEANDWORDTHEBEHAVIORALDATASSHOWTHATLIETASKSPRODUCESIGNIFICANTLYMUCHLONGERRTTHANTHATOFTRUETASKS，BUTTHEACISMUCHLOWERSIGNIFICANTLYTHENPICTUREWORDSENTENCEINTHERTSENTENCEWORDPICTUREINTHEACTHEERPSDATASSHOWTHATLIEANDTRUEEEGHAVETHESAMECURVETRAITS，NAMELYTHEYALLCONTAINONENLOOWHICHPOTENTIALISABOUT100MSANDONEP200WHICHPOTENTIALISABOUT180MSCOMPONENT；LATESLOWWAVECOMPONENTPRODUCEONEBIGGESTNEGATIVEWAVEPEAKBY400MS，ANDKEEPINGAMORENEGATIVETENDENCYINLIEEEG，THENLASTTO1200MSLATEREXCEPTFORWORDMATERIAL，THEOTHERSALLPRODUCESIGNIFICANTDIFFERENCESBETWEENLIETASKANDTRUETASK，ONPPREFRONTALCORTEX，ANTERIORCENTRALCONVOLUTION，PARIETALISCORTEX，PARTSOFTEMPORALISGYRIFURTHERMORE，THESEDIFFERENCESINSENTENCEMATERIALISLATERFOR250MSTHANTHATINPICTUREACCORDINGTOABOVEANALYSISABOUTDATAS，WECARLCOMETOASFOLLOWINGCONCLUSIONSRTANDACISEFFECTIVEANDRELIABLEINDIFFERENTIATINGWHICHISALIEORATRUE，INADDITION，MAYBEPICTUREISTHEBESTMATERIALFORDETECTINGDECEPTION；THEPROCESSINGOFLIEISTHESAMEASTHATII

簡介：第二軍醫(yī)大學博士學位論文淀粉樣前體蛋白可溶性Q片段與睡眠的相關性及潛在的認知保護作用SOLUBLEAMYLOIDPRECURSORPROTEINALPHACORRELATIONWITHSLEEPANDUNDERLYINGCOGNITIVEPROTECTION研究生張鵬指導教師趙忠新教授導師組成員趙瑛教授周暉教授培養(yǎng)單位學科專業(yè)黃流清教授賀斌教授長征醫(yī)院神經病學夏斌教授王文昭教授獨創(chuàng)性聲明本人聲明所呈交的學位論文是我個人在導師指導下進行的研究工作。除了文中特別加以標注和致謝的地方外，論文中不包含其他人已經發(fā)表或撰寫過的研究成果。與我一同工作的同志對本研究所做的任何貢獻均已在論文中作了明確的說明并表示謝意。本人承擔本聲明的法律責任。學位論文作者簽名徉∥參日期20126月6日學位論文版權使用授權聲明本人完全了解第二軍醫(yī)大學有關保留、使用學位論文的規(guī)定，第二軍醫(yī)大學有權保留并向國家有關部門或機構送交論文的復印件和電子版，允許論文被查閱和借閱。本人授權第二軍醫(yī)大學可以將學位論文的全部或部分內容編入中國學位論文全文數(shù)據(jù)庫、中國優(yōu)秀博碩士學位論文全文數(shù)據(jù)庫等數(shù)據(jù)庫進行檢索?？梢圆捎糜坝?、縮印或掃描等復制手段保存、匯編學位論文。保密的學位論文在解密后適用本授權書學位論文作者簽名貉L暢日期2012年6月6日孫娩∞導師簽名紗盡1

簡介：點擊查看更多貫葉連翹提取物對甲型流感病毒的作用及免疫調節(jié)機制的研究.pdf精彩內容。

簡介：目的機體天然免疫系統(tǒng)在抵御HIV感染中發(fā)揮重要作用，APOBEC3GAPOLIPOPROTEINBMRNAEDITINGENZYME，CATALYTICPOLYPEPTIDELIKE3G是新發(fā)現(xiàn)的細胞內天然免疫因子，具有抑制HIVVIF缺失病毒HIV△VIF復制的能力。VIFVIRIONINFECTIVITYFACT是HIV1病毒的調節(jié)蛋白之一，以細胞依賴方式在新生病毒的組裝、釋放或者成熟階段增加其感染性。體外實驗顯示，APOBEC3G通過誘導HIV△VIF病毒逆轉錄過程中生成的CDNA，將胞嘧啶脫氨基轉變?yōu)槟蜞奏?，誘導病毒基因組DNA的致死性突變而抑制病毒復制。但當病毒VIF蛋白存在時，可通過阻止APOBEC3G組裝入病毒顆粒以及誘導泛素化降解等途徑來拮抗APOBEC3G。當VIF重要氨基酸位點發(fā)生改變時，其對APOBEC3G的降解作用明顯減弱或完全喪失。方法1研究對象由河南省疾病預防與控制中心以及中國醫(yī)科大學艾滋病研究所艾滋病確認實驗室經WESTERNBLOT試驗確認為陽性，未經抗病毒治療的HIVAIDS患者。調查與采血前征得患者同意，并簽訂知情同意協(xié)議?；颊哐獫{標本病毒核酸經套式聚合酶鏈反應擴增GAGPOL區(qū)，序列測定和分析確定為B亞型。根據(jù)HIVAIDS患者感染時間和CD4T細胞數(shù)量分為緩慢進展組SLOWPROGRESS，SP感染時間＞10年，未經抗病毒治療，CD4T細胞數(shù)量＞500個ΜL；典型進展HIV組HIV感染時間＞5年，CD4T細胞數(shù)量介于200～500個ΜL，無艾滋病指征性疾?。坏湫瓦M展AIDS組AIDS感染時間＞5年，CD4T細胞數(shù)＜200個ΜL，和或合并艾滋病指征性疾病。HIV抗體陰性健康對照來自河南省。2CD4T淋巴細胞計數(shù)應用美國BECTONDICKINSON公司的流式細胞儀FACSCALIBUR測定CD4、CD8、CD3T淋巴細胞絕對值。將20ΜLCD4CD8CD3TRITEST試劑加入CD4絕對計數(shù)管，加入50ΜL抗凝血，室溫避光15MIN，加入免洗溶血素450ΜL，室溫避光15MIN，F(xiàn)ACSMULTISET軟件檢測并進行自動分析。3病毒載量測定用200ΜL病人血漿采用標準版模板制備法提取RNA，采用ROCHE公司HIV1MONIT15COMMERCIALKIT在COBASAMPLIC自動載量儀上以RTPCR方法測定病毒載量。HIV病毒載量經LOG10對數(shù)轉化后用于統(tǒng)計分析。4標準品質粒的構建取健康人EDTA抗凝全血5ML，常規(guī)提取外周血PBMC。采用QIAGEN公司的RNEASYMINIKIT提取細胞總RNA。取1ΜG總RNA，按照PROMEGA公司的IMPROMⅡTMREVERSETRANIONSYSTEM說明書逆轉錄合成CDNA。PCR擴增APOBEC3G和GAPDH開放讀碼框架全長，PCR產物經回收純化后克隆到PGEMT載體，轉化到DH5Α感受態(tài)菌中，藍白篩選后獲得陽性克隆，測序驗證，純化重組質粒，紫外分光光度計定量后根據(jù)分子量換算為分子拷貝數(shù)，10倍系列稀釋質粒制備質粒標準品。5實時定量PCR檢測APOBEC3GMRNA水平取健康對照和HIV感染者EDTA抗凝全血10ML，常規(guī)提取外周血PBMC。采用QIAGEN公司的RNEASYMINIKIT提取細胞總RNA。選用PROMEGA公司的IMPROMⅡTMREVERSETRANIONSYSTERM和隨機引物逆轉錄合成CDNA。APOBEC3GNM021822和內參GAPDHNM0020463特異性探針序列為FAMGCAACCAGGCTCCACATAAACACGGNFQ；FAMGGACTCATGACCACAGTCCATGCCANFQ。25ΜL實時PCR反應體系2TAQMANRUNIVERSALPCRMASTERMIX125ΜL，20TAQMANGENEEXPRESSIONASSAY125ΜL、無RNASEDNASE水925ΜL、CDNA2ΜL。應用ABI7500實時PCR儀進行檢測，反應條件50℃2MIN，95℃10MIN，95℃15S、60℃1MIN40循環(huán)。APOBEC3G和GAPDHMRNA絕對拷貝數(shù)由系列稀釋的質粒構建的標準曲線獲得，每份標本設2個復孔結果取均值。6WESTERNBLOT方法檢測PBMC中APOBEC3G蛋白量將PBMC置于冰上，加入裂解液，充分裂解細胞后，4℃，12000RPMMIN離心20MIN，將上清吸到另一個EPPENDF管中，LOWRY法蛋白定量。加入3上樣BUFFER混合，煮沸5分鐘，冷卻后取50ΜG蛋白進行SDSPAGE電泳。然后通過半干式轉印到硝酸纖維素膜上，脫脂奶粉封閉，按預染標記的分子量剪裁轉印膜，分別加入兔抗人APOBEC3G1200、GAPDH12000一抗，37℃孵育1H，4℃過夜，洗膜，加入HRP標記的羊抗兔二抗，37℃30MIN，ECL發(fā)光顯色，圖像采集及分析處理。7套氏聚合酶鏈反應NESTPCR擴增HIV1前病毒VIF全長及序列分析1套氏聚合酶鏈反應NESTPCR擴增HIV1前病毒VIF基因取每例感染者全血1ML，應用QIAAMPBLOODKITQIAGEN提取前病毒基因組DNA。取5ΜLDNA進行NESTPCR擴增。外側引物序列為PO15GAAGCCATGCATGGACAGGT，VIF2AGGCTGACTTCCTGGATG。內側引物序列為VIF3CATAAAAGTAGTGCCAAGAAGAAAAG，VIF4TCTTAAGCTCCTCTAAAAGCTC。取PCR產物于1％瓊脂糖凝膠電泳，經與MARKER比對，確認所需片段，用QIAQUIKGELEXTRACTIONKIT試劑盒純化基因片段。將純化后的PCR產物，以VIF3、VIF4為測序引物，使用美國APPLIEDBIOSYSTEM公司的BIGDYETERMINATSEQUENCING試劑盒和ABI377型DNA測序儀進行測序。2VIF核苷酸和氨基酸序列特征分析下載HIV序列庫WWWHIVLANLGOV中各亞型國際、國內HIV1VIF序列，用BIOEDIT軟件包中CLASTALW程序對下載序列及測得序列進行排列比對。以PHYLOGENY工具鄰位相連法NEIGHBJOINING生成系統(tǒng)進化樹。使用TRANSLATION程序將核苷酸序列翻譯成蛋白質的氨基酸序列并與標準序列進行比對，分析各氨基酸位點的變化。8體外SF33感染PBMC和IFNΑ刺激實驗FICOLL密度梯度離心法分離健康人和HIV感染者PBMC，常規(guī)培養(yǎng)于含10％小牛血清的RPMI1640培養(yǎng)液中37℃，5％CO2。實驗組細胞分別感染500TCID50的SF33和或加入終濃度為100UML、400UML、800UML的IFNΑ，于培養(yǎng)不同時間點收集培養(yǎng)上清于20℃凍存，用于P24檢測；同時收集孔內細胞于15ML離心管，1000RPMMIN離心10分鐘，PBS洗滌2次，棄盡上清，分別提取細胞總RNA和蛋白，用于APOBEC3G的MRNA和蛋白檢測。9培養(yǎng)上清P24檢測采用BIOMERIEUX公司P24ELISA檢測試劑盒，嚴格按照說明書操作。10、統(tǒng)計學處理采用SPSS130統(tǒng)計軟件包進行統(tǒng)計學分析。計量資料結果以均值±標準差表示，病毒載量經LOG10對數(shù)轉換后用于統(tǒng)計學分析。研究對象不同分組APOBEC3G表達差異采用單因素方差分析，并進行均數(shù)兩兩比較；表達水平與CD4T細胞數(shù)量、病毒載量的相關性采用PEARSON相關分析。組間氨基酸取代頻率的差異比較采用FISHERS精確概率檢驗。氨基酸位點有無取代兩組間CD4T細胞數(shù)和病毒載量的組間比較采用均數(shù)T檢驗。結論1中國HIVAIDS患者外周血單個核細胞APOBEC3G表達水平與疾病進展密切相關；高水平的APOBEC3G對感染HIV后疾病緩慢進展具有保護作用。2中國HIVAIDS患者HIV1VIF與APOBEC3G作用的重要氨基酸位點相對保守。VIF序列中V7A取代與低病毒載量、高CD4T細胞數(shù)有關；F39V取代與高病毒載量、低CD4T細胞數(shù)有關。該位點氨基酸改變不影響APOBEC3G表達水平，提示F39V取代和V7A取代可能是與APOBEC3G表達水平無關的影響疾病進程的病毒學因素。3IFNΑ能夠誘導HIV感染者PBMC中APOBEC3GMRNA和蛋白的表達，且與病毒復制抑制密切相關。

簡介：浙江大學醫(yī)學院碩士學位論文新型溶癌腺病毒SG511BECN對白血病細胞殺傷的機制研究姓名李璐申請學位級別碩士專業(yè)內科血液學指導教師孟海濤20100201浙江大學碩一1學位論文中文摘要第二部分溶癌腺病毒SG511BECN誘導白血病細胞自噬性死亡的機制研究。目的探討SG511BECN抗白血病效應，通過體外試驗證實SG511BECN可誘導白血病細胞發(fā)生自噬性死亡，而對正常細胞幾無影響。在此基礎上進一步探討其潛在作用機制。從而為白血病治療提供更具靶向性的基因一病毒療法。方法流式細胞術檢測SG511對各種白血病細胞株的感染效率。通過熒光顯微鏡觀察微管相關蛋白1輕鏈3LC3的表達來檢測其可否誘導白血病細胞自噬，并進一步通過WESTERNBLOT免疫印跡法檢測LC3表達水平的變化。運用免疫熒光技術鑒定細胞中BECLIN一1的定位關系。應用小干擾技術通過WESTERNBLOT、熒光顯微鏡檢測耐紫外線相關基因表達蛋白UVRAG表達水平的改變來探討SG511BECN誘導自噬發(fā)生的潛在機制，并進一步通過MTT法檢測UVRAGSIRNA處理后的白血病細胞生長增殖情況。熒光顯微鏡觀察活性氧物質ROS的表達變化檢測SG511BECN誘導的白血病細胞自噬發(fā)生過程中ROS所發(fā)揮的作用。MTT法測定SG511BECN對K562的細胞毒性及對正常外周血單個核細胞的毒性。MTT法測定使用ROS抑制劑TRION處理白血病細胞后，細胞的生長情況。結果I體外試驗中SG511可有效感染白血病細胞株。2SG51卜BECN可有效誘導白血病細胞株LC3K562自噬并伴隨LC3II的表達，隨作用時間的延長自噬現(xiàn)象逐漸減低。3當SG511BECN感染細胞后定位于細胞的內質網膜上。4用UVRAGSIRNA處理SG511BECN作用過的LC3K562細胞株后，綠色自噬熒光明顯減少，并且MTT結果顯示白血病細胞得到保護，SG511BECN對其的細胞毒作用明顯減弱。說明UVRAG是SG511BECN誘導自噬不可或缺的物質。5對比之下SG511BECN對正常外周血單個核細胞的毒性殺傷效應較小，具有靶向殺傷腫瘤VRI