簡介：中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院哈爾濱獸醫(yī)研究所深圳2014年4月29日,雞馬立克氏病流行及防控,劉長軍,雞馬立克氏病,1907發(fā)現(xiàn)1961病原MDV、命名中國70年代主要感染雞和火雞淋巴細(xì)胞的溶細(xì)胞感染和T細(xì)胞淋巴瘤最早出現(xiàn)在34周，高峰在1230周年齡易感性日齡越小易感性越高1日齡雛雞比10日齡以上雛雞易感性高幾百倍水平傳播羽毛囊上皮細(xì)胞復(fù)制病毒長期排毒通過空氣傳播發(fā)病率5～30,MAPOFTHEEVOLUTIONOFMDINCIDENCECOLORSREPRESENTTHECURRENTEXISTENCEOFMDOUTBREAKSASFOLLOWEDREDCURRENTMDOUTBREAKSYELLOWNOCURRENTMDOUTBREAKSGREYDATANOTAVAILABLETHEEXISTENCEOFMDOUTBREAKSDURING1990SISINDICATEDBYVERTICALSTRIPES,秘魯,俄羅斯,尼日利亞,摩洛哥,葡萄牙,中國,雞馬立克氏病導(dǎo)致臟器腫瘤及神經(jīng)腫瘤,馬立克氏病引起免疫器官萎縮,胸腺,法氏囊,對照VVVV,INTRODUCTION,馬立克氏病病原MDV,MDV屬于Α皰疹病毒科、馬立克氏病病毒屬。MDV粒子由核芯、核衣殼、被膜和囊膜組成，在感染細(xì)胞內(nèi)可見直徑為85160NM的六邊形裸露顆粒即核衣殼。偶爾也能見到150160NM的有囊膜的病毒粒子；基因組為雙股線性DNA長度約為166180KB。,,MDV分類,INTRODUCTION,MDV的復(fù)制,早期溶細(xì)胞感染潛伏感染第二次溶細(xì)胞感染腫瘤增生產(chǎn)生成熟病毒粒子,早期溶細(xì)胞感染,MDV在羽毛囊上皮細(xì)胞中的復(fù)制,淋巴器官神經(jīng)組織、羽毛囊上皮腫瘤,新特點,宿主范圍擴(kuò)大火雞感染發(fā)病混合感染REV、ALV（雞病毒重組LTR的插入）；NDV；細(xì)菌；霉菌毒力增強(qiáng)突破不同MD疫苗的保護(hù)作用急性發(fā)病癥狀34周齡即開始出現(xiàn)腫瘤，89周齡時已很嚴(yán)重，并能在3周齡引起特別嚴(yán)重的短暫麻痹，從而導(dǎo)致很高的死亡率不同日齡雞感染性ROSENBERG等，注射和同居接觸19、34和49日齡的SPF雞，出現(xiàn)臨床發(fā)病和腫瘤病變,INTRODUCTION,MDV毒力進(jìn)化,MDV毒力越來越強(qiáng)M溫和型、V強(qiáng)毒力型、VV超強(qiáng)毒力型、VV超超強(qiáng)毒力型,臨床癥狀由主要是慢性多發(fā)性神經(jīng)炎轉(zhuǎn)變?yōu)槎喟l(fā)性神經(jīng)炎和內(nèi)臟淋巴瘤、內(nèi)臟淋巴瘤、神經(jīng)癥狀、嚴(yán)重的腦水腫和急性死亡,國內(nèi)MD發(fā)病情況黑龍江病例（多發(fā)性腫瘤）,圖1，2，3分別為牡丹江地區(qū)病料（瘤化的卵巢、腸系膜和脾臟）。圖4，5分別為大慶地區(qū)病料（瘤化的卵巢和腫大的肝臟）,青腳黃雞3/3MD，1/3只AL,270日齡，900只海蘭褐，病死近100只，,吉林省病例（多發(fā)性腫瘤）圖1為發(fā)病雞，2和3為系膜瘤，4為肝臟瘤。,長春，8/11MD，5000只，至110日齡，死1000,遼寧省病例（混感）圖1為肌肉瘤，2為瘤化的腺胃，3為瘤化的肝臟。,4萬套，海蘭褐蛋種雞，110日齡發(fā)病，A亞群ALV9/11AGP2/11，MD，PCR3/8MD公雞40A亞群,江蘇病例（烏雞和麻雞）腎臟腫,,40和60日齡，10,山東,110日齡，10000只，發(fā)病2030，9/10MD,腺胃腫瘤化為特征的病例,大連,沈陽,腺胃腫瘤化為特征的病例,哈爾濱,牡丹江,脾臟腫瘤,20112013年MDV流行病學(xué)檢測,我國MDV呈經(jīng)常性、普遍性散發(fā)狀態(tài),省雞場病料陽性雞場陽性病料陽性率,,,MDV與REV、ALV和CAV的混合感染（20112013）,混合感染是常見現(xiàn)象,MDV分離毒株特性,注NA表示未知，“”表示未檢測。,MDV流行毒株致病性多在VV（9）VV（4）符合強(qiáng)、弱毒的分子特征,177BP,10株MDV分離毒株對SPF雞的致病性,MDV流行毒株對雞具有高致病性,5株MDV分離毒株對免疫雞（CVI988疫苗）的致病性,MDV致病性增加；現(xiàn)有疫苗對某些毒株不能提高完全保護(hù)。,MDV與REV混感和分子重組,一個混感感染病例2011年某雞場商品蛋雞，40日齡開始發(fā)病。癥狀腺胃炎，腺胃腫；雞瘦?。挥兴劳?；無明顯腫瘤。送檢雞52日齡。檢測結(jié)果MDV、REV,電鏡,負(fù)染,切片,,,MDV,REV,存在MDV和REV病毒粒子,高發(fā)病率、高致死率、高腫瘤率；突破疫苗保護(hù),致病性,分離株攻毒腺胃MDV腫瘤特征,腫瘤組織病理學(xué)觀察,組織上以多形態(tài)的淋巴細(xì)胞增生浸潤為基礎(chǔ)，包括小型、中型和大型淋巴細(xì)胞。即，細(xì)胞的大小不一，形態(tài)各異。細(xì)胞核淡明，核仁大而明顯。浸潤范圍廣泛，取代原來的正常組織（腺胃）。腺胃的腫瘤細(xì)胞可見多數(shù)的異常核分裂像。同時可見腫瘤細(xì)胞的壞死（核濃縮）,CVI988分離株組,腫瘤的差異REV腫瘤特征,腫瘤細(xì)胞為成淋巴細(xì)胞。細(xì)胞大小均一，細(xì)胞核淡明，核仁1數(shù)個。細(xì)胞漿淡染，細(xì)胞界限不明顯。未見核分裂像。腫瘤細(xì)胞呈占位性，呈局灶性浸潤。腫瘤組織病灶通常呈圓形或類圓形。未見腫瘤細(xì)胞凋亡和壞死。,背景反轉(zhuǎn)錄病毒REV在皰疹病毒MDV基因組中的插入,重組基礎(chǔ)混合感染現(xiàn)象商業(yè)雞群多致瘤病毒共感染共同的宿主淋巴細(xì)胞和相同的微環(huán)境，MDV感染B和T淋巴細(xì)胞，轉(zhuǎn)化T；ALV引起骨髓細(xì)胞轉(zhuǎn)化MDV和ALV都在成纖維細(xì)胞中復(fù)制，ALV胸腺，法氏囊中復(fù)制；REV，淋巴細(xì)胞或網(wǎng)狀內(nèi)皮細(xì)胞，成纖維細(xì)胞中復(fù)制反轉(zhuǎn)錄病毒為了自身復(fù)制，可以整合到任何雙鏈DNA中（宿主、MDV、HVT、禽痘病毒）,細(xì)胞中相同的復(fù)制位置,REV在MDV基因組中的插入驗證HOTSPOTPCR（REV和MDV上下游交叉引物檢測，病毒重組的驗證）,MDVPBACC全基因組序列,IRS區(qū)插入的相對位置（MDVMD5）,,,,,,,,LTR,MDV086（細(xì)胞質(zhì)蛋白）,MDV085（預(yù)測蛋白）,MDV083（反義RNA蛋白）,MDV084（ICP4）,,,,MDV087（MDV1S2）,MDV088（ICP22）,MDV089（US10）,,IRS區(qū),TRS區(qū)插入的相對位置（MDVMD5）,,,LTR,,MDV097（MDV1S2）,,,MDV096（GE）,,MDV095（GI）,,MDV098（細(xì)胞質(zhì)蛋白）,,MDV099（預(yù)測蛋白）,,MDV101（反義RNA蛋白）,,MDV100（ICP4）,,TRS區(qū),插入重組的意義反轉(zhuǎn)錄病毒是混亂宿主和皰疹病毒遺傳物質(zhì)的元件之一。這種重組可能改變MDV的組織趨向性、傳播方式、致病性、疫苗保護(hù)性MDV的進(jìn)化,MDVMEQ序列88株，測定序列63株（20062013）參考序列25株（中國分離毒株11株，國外毒株14株）我們測的63株中除了3株位于弱毒分支外，其他的60株位于一個獨立進(jìn)化分支（不同于國外的毒株）。,MDVMEQ,我國MDV流行毒株處于一個獨立的進(jìn)化分支,,,,AMDV毒株的長重復(fù)區(qū)遺傳進(jìn)化樹,BMDV毒株的短重復(fù)區(qū)遺傳進(jìn)化樹,,,15株MDV（全基因組）分子進(jìn)化,,,,,MD的防控,防止雛雞MDV野毒早期感染控制混感重組、加重MD免疫特點非清除性抗腫瘤免疫、占位干擾作用超感染和超感染抑制控制傳播疫苗毒株感染程度免疫劑量二次免疫,控制污染源抗病力免疫,MD疫苗株的應(yīng)用,FOURGENERATIONSOFMDVACCINES致弱的血清1型毒株1970HVT1970S雙價苗HVTSB11983CVI988RISPENS株1990S，“814”株,我國MD疫苗使用情況,曾經(jīng)使用的疫苗HVT、CVI988、“814”、HVTSB1、HVTZ4、HVTSB1“814”、CVI988HVT,當(dāng)前主要使用的疫苗種雞、蛋雞CVI988、“814”、HVT、CVI988HVT肉雞主要為HVTHVTIBDVVP2“立克法”“威力克”,814弱毒疫苗種毒株的建立,策略自然弱毒中篩選、建立弱毒疫苗種毒株優(yōu)點安全性好、穩(wěn)定性好和免疫效力好。黑龍江省牡丹江（白洛克和來航）多年沒有發(fā)生MD毒株培育K株DEF、CES；“814”S株DEF、QEF毒株血清型和致病性血清1型，自然弱毒株,安全性（1）接種雞12個月（2）回歸易感雞10代免疫原性實驗室免疫攻毒（J1株）K株的KC25和45代（穩(wěn)定性）PI889傳代特點1KC50非融合細(xì)胞50120代也很少見2病毒粒子的數(shù)量較多幾乎每個細(xì)胞都有病毒粒子3容易見到有囊膜的完全病毒粒子母源抗體干擾HVT、“814”免疫雞群,MD疫苗“814”株凈化凈化必要性強(qiáng)細(xì)胞嗜性禽源RNA病毒、支原體污染免疫失敗的主要原因之一MDV814病毒DNA拯救,“814”克隆株的免疫原性,總結(jié)1我國MD流行呈現(xiàn)散發(fā)狀態(tài)，發(fā)病率階段性增高。2多種病原混感是疫苗免疫失敗的一個重要原因。3我國流行的MDV毒力向更高方向進(jìn)化。4進(jìn)化分析表明，我國的MDV流行株已經(jīng)發(fā)生明顯變化，并且處于一個獨立的進(jìn)化分支。5正確使用疫苗和控制病原污染是防控MD的主要方法。,謝謝大家,,
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