創(chuàng)新藥藥TOP-03的血藥逍度測定及排泄研究.pdf

1、TOP—03是第二軍醫(yī)大學藥學院藥物化學教研室全合成的高喜樹堿衍生物之一，藥理實驗表明該化合物具有明顯的抗腫瘤活性。本研究主要目的在于對其臨床前藥代動力學做整體的評價。本文建立了靈敏、可靠的LC—MS/MS方法，能夠滿足藥物臨床前藥代動力學研究中的技術要求，同時測定了血漿、尿液、糞便、膽汁等多種生物樣品中TOP—03及其活性代謝產物10—羥基—7—甲基—高喜樹堿(TOP—01)的濃度，初步明確了該藥物及其活性代謝產物的體內處置過程，為進

2、一步開展臨床研究及制劑研究等提供參考依據。
　　 一、生物樣品中TOP—03定量分析方法的建立及確證
　　 本文對TOP—03和TOP—01建立了快速靈敏的LC—MS/MS生物樣品定量分析方法。血漿樣品經過簡單的蛋白沉淀處理；尿液和膽汁樣品經過流動相的稀釋后高速離心；糞便樣品經過流動相的萃取處理。色譜部分分析柱型號為Ultimate C8，5μm，50×4．6mm；流動相組成為90％乙腈(0．1％甲酸)：水=90：10，

3、采用等梯度洗脫方式，流速0．30mL/min，進樣量20μL。采用ESI負離子檢測模式、MRM工作方式進行質譜分析。按照《化學藥物非臨床研究技術指導原則》的基本要求進行完整的方法學考查，所有生物樣品測定的專屬性、線性、準確度、精密度、回收率、基質效應、稀釋效應、穩(wěn)定性等均滿足生物樣品的定量分析要求。該測定方法成功應用于Beagle犬和SD大鼠的血漿樣品測定及尿液、糞便和膽汁中的排泄研究。
　　 二、TOP—03在Beagle犬體

4、內的藥代動力學研究
　　 本試驗設計Beagle犬單劑量靜脈注射給藥TOP—03注射液1．5mg/kg、3mg/kg、6mg/kg三個劑量組進行藥代動力學研究。采用LC—MS/MS方法分別測定了三個劑量組Beagle犬體內不同時間點血漿樣品中TOP—03和TOP—01的濃度。經非房室模型法估算藥代動力學參數。結果表明，Beagle犬單劑量靜注給藥TOP—03三個劑量組(1．5mg/kg、3mg/kg、6mg/kg)后，TOP—0

5、3的藥代動力學藥時曲線末端相消除半衰期(t1/2)分別為1．47±0．30h、1．68±0．11h、1．26±0．16h； AUC0～∞分別為2．32±1．49μg·h/mL、3．10±0．52μg·h/mL和3．64±0．64μg·h/mL；主要活性代謝產物TOP—01的消除半衰期(t1/2)分別為2．20±1．55h、3．91±1．38h、3．86±0．72h，AUC0～∞分別為0．224±0．09μg·h/mL、1．04±0．17

6、μg·h/mL和2．374±0．31μg·h/mL。原型藥物和主要活性代謝產物TOP—01的AUC與給藥劑量基本成正相關關系，相關系數R2分別為0．9181和0．9970。
　　 三、TOP—03在SD大鼠體內的藥代動力學研究
　　 本試驗設計SD大鼠單劑量尾靜脈注射給藥TOP—03注射液5mg/kg、10mg/kg、20mg/kg三個劑量組進行藥代動力學研究。采用LC—MS/MS方法分別測定了三個劑量組給藥后SD大鼠不

7、同時間點血漿樣品中TOP—03和TOP—01的濃度。經非房室模型法估算藥代動力學參數。結果表明，SD大鼠單劑量靜注給藥TOP—03三個劑量組(5mg/kg、10mg/kg、20mg/kg)后，TOP—03的藥代動力學藥時曲線末端相消除半衰期(t1/2)分別為3．434±0．84h、1．38±0．29h、1．194±0．15h；AUC0～∞分別為1．694±0．18μg·h/mL、3．97±0．47μg·h/mL和7．45±0．30μg·

8、h/mL；主要活性代謝產物TOP—01的消除半衰期(t1/2)分別為3．34±5．06h、3．14±1．70h、2．74±0．62h，AUC0～∞分別為0．204±0．05μg·h/mL、1．21±0．44μg·h/mL和2．70±0．17μg·h/mL。原型藥物和主要活性代謝產物TOP—01的AUC與給藥劑量成正相關關系，相關系數R2分別為0．9951和0．9936。
　　 SD大鼠單劑量尾靜脈注射給藥TOP—03(10mg/

9、kg)后，于給藥后收集尿液、糞便(0～72h)及膽汁(0～12h)，采用LC—MS/MS測定方法分別測定了給藥后各動物不同時間段內三種生物樣品中TOP—03和TOP—01的濃度。結果表明，72h內TOP—03及活性代謝產物TOP—01在SD大鼠體內經尿液累積排泄率分別為0．12％、1．40％，糞便累積排泄率分別為0．18％、1．68％。12h內膽汁累積排泄率分別為0．09％、1．82％。由以上結果我們初步推斷TOP—03主要是代謝消除，