工頻電磁場和轉化生長因子-β3對大鼠前軟骨干細胞增殖與分化的影響.pdf

1、目的: 研究不同磁感應強度的脈沖工頻電磁場輻射對大鼠前軟骨干細胞(PSCs)增殖的影響；探討轉化生長因子-β3（TGF-β3）體外誘導大鼠前軟骨干細胞向成軟骨方向分化的可行性以及劑量效應關系。 方法: 體外分離純化培養(yǎng)大鼠前軟骨干細胞，取第3代前軟骨干細胞,置于不同磁場感應強度的工頻（50Hz）脈沖電磁場中輻射處理（每日2次，每次持續(xù)45min），根據不同的電磁場感應強度（0.1 mT、0.5 mT、1.0 mT和1.5 mT）

2、分為4組,同時設一對照組（不加電磁場干預），采用MTT法、流式細胞術測定細胞增殖和細胞凋亡情況，Western Blot法分析Bcl-2蛋白表達情況；將分離純化的大鼠前軟骨干細胞置于含有不同劑量TGF-β3的誘導培養(yǎng)液中培養(yǎng),并依據培養(yǎng)液中TGF-β3的濃度分為5個實驗組和1個對照組（不含TGF-β3），觀察細胞生長情況,分別進行Ⅱ型膠原的免疫組織化學檢測及逆轉錄－聚合酶鏈反應(RT-PCR)檢測Ⅱ型膠原mRNA表達。 結果:

3、不同磁場強度的工頻脈沖電磁場輻射均明顯促進前軟骨干細胞增殖，但不同磁場強度的電磁場促增殖的效應也不同,其中1.0 mT組的促增殖效果最為顯著，實驗48h內細胞增殖水平無明顯變化,工頻脈沖電磁場干預96h后細胞的增殖水平提高顯著(P<0.05)，各實驗組細胞凋亡率均明顯降低(P<0.05)，Bcl-2凋亡蛋白的表達增強；細胞在誘導培養(yǎng)液中生長良好，免疫組織化學檢測對照組Ⅱ型膠原表達陰性，而含TGF-β3的誘導培養(yǎng)液誘導的各組細胞Ⅱ型膠原表

4、達均陽性，其中10μg/L組陽性率最高，RT-PCR的半定量檢測也顯示10μg/L組Ⅱ型膠原mRNA的表達量最大，與其它各組相比較，差異均有顯著意義（P<0.05）。 結論: 工頻電磁場能促進大鼠前軟骨干細胞增殖,并可能通過上調Bcl-2蛋白的表達從而抑制細胞凋亡,均與磁感應強度及作用時間相關，1.0 mT為促進前軟骨干細胞增殖的最佳磁感應強度；TGF-β3在體外能有效誘導PSCs向軟骨細胞定向分化，其對PSCs的促分化作用存在