微囊藻毒素-LR對大鼠睪丸支持細胞氧化應激影響.pdf

1、微囊藻毒素(microcystins,MCs)是由水體中藍藻類產生的具有生物活性的單環(huán)七肽化合物。1990年,科學家首次發(fā)現(xiàn),MC進入肝細胞后,能強烈地抑制蛋白磷酸酶(PP1、PP2A)的活性,這是MC致毒的最重要的分子基礎；1996年Pour等報道,巴西一家血液透析中心因使用含MCs污染的水作腎透析液,導致60例病人死亡。從此,因MCs污染所造成的野生動物、家畜、家禽等中毒、死亡的事件陸續(xù)有了很多報道。MCs的毒性、毒性機制以及它對人

2、體健康的影響,成為研究的熱點。
　　 MCs從被發(fā)現(xiàn)以來,肝臟一直是其第一靶器官。近來有發(fā)現(xiàn)水產動物器官里,性腺是第2個靶器官,所以MCs可能具有生殖毒性。國內外目前關于MCs引起的生殖毒性研究報道很少,機制也不清楚。
　　 目的:本課題組從事MCs毒性的相關研究,結果發(fā)現(xiàn)MC-LR可引起小鼠睪丸細胞DNA-蛋白質交聯(lián),導致生殖損傷。本研究是在先前的研究基礎上,以體外分離原代培養(yǎng)的大鼠睪丸支持細胞為研究對象,使其暴露于不

3、同濃度的MC-LR,研究氧化應激在大鼠生殖系統(tǒng)細胞損傷中的作用。以此探討氧化應激機制在MCs造成的雄性生殖功能損傷中的作用,為進一步研究MCs對哺乳動物生殖毒性的影響提供理論依據。
　　 方法：
　　 1、分離純化清潔級未成年雄性SD大鼠睪丸支持細胞,建立體外原代培養(yǎng)模型,用Feulgen染色進行鑒定。MTT法描述生長曲線。以濃度為0～15μg/L的MC-LR對支持細胞染毒24h,確定MC-LR對細胞活性的影響。

4、　　 2、測定MC-LR對細胞內LDH、MDA、SOD、ROS的影響:用不同濃度(0、0.15μg/L、1.5μg/L、15μg/L)MC-LR處理支持細胞,分別在6、12、24h后,提取細胞,用DCFH-DA法測定ROS,比色法測定LDH,TBA法測定MDA,羥胺法測定SOD。
　　 3、統(tǒng)計學分析:運用SPSS12.0統(tǒng)計軟件的單因素方差分析(analysis ofvariance,ANOVA)對數(shù)據進行統(tǒng)計學分析(檢驗水

5、準α=0.05)
　　 結果：
　　 1、本次試驗分離培養(yǎng)的支持細胞體外生長良好,細胞純度較高,可以用于體外實驗研究。不同濃度的MC-LR染毒體外培養(yǎng)第4d的支持細胞24h后,結果發(fā)現(xiàn)MC-LR在0～15μg/L濃度范圍時,細胞存活率無明顯影響。
　　 2、本次研究發(fā)現(xiàn),MC-LR作用于支持細胞后6～24h,.各處理組的細胞內劑量、時間依賴性ROS均有所增加,12h和24h時高劑量組與對照組相比具有統(tǒng)計學意義(P

6、＜0.05)。各處理組的細胞內劑量、時間依賴的LDH漏出率改變無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。此次不同的染毒時間及各染毒劑量組的細胞中MDA含量變化與對照組相比差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。與對照組相比24h中等劑量和高劑量SOD活性降低,差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。
　　 結論：
　　 1、MC-LR在0～15μg/L濃度范圍內對大鼠睪丸支持細胞的存活率無明顯影響。
　　 2、MC-LR可以導致體外培養(yǎng)