Ezrin蛋白表達對鼻咽癌患者根治性治療預后的預測價值.pdf

1、1.研究背景: 鼻咽癌為我國常見的惡性腫瘤之一，我國的鼻咽癌發(fā)病人數(shù)占世界總數(shù)的80﹪左右。目前，放射治療仍是最有效的治療手段。5年生存率達到5096-60﹪。遠處轉移和局部復發(fā)已經成為治療失敗的主要原因。而一直以來，預測初治鼻咽癌患者預后的因素往往局限在部分臨床指標上，包括男性、有無顱神經侵犯、疾病臨床分期早晚、雙側淋巴結侵犯大小以及患者治療效果等，但實際中，臨床預后指標相同的病人也常常表現(xiàn)出不同的疾病轉歸，有的長期隨訪無疾病

2、進展，有的治療結束后較短時間內出現(xiàn)腫瘤轉移，這就提示我們腫瘤個體生物學差異是影響預后的重要因素之一。但到目前為止，尚未發(fā)現(xiàn)臨床適用的，可預測鼻咽癌轉移或復發(fā)的生物學指標。 長期研究中人們發(fā)現(xiàn)腫瘤轉移是基因調控下的多階段、多因素的極為復雜的病理過程。而近年來，與腫瘤轉移過程高度相關的蛋白及基因已成為腫瘤轉移機制研究領域的熱點，因為這些蛋白及基因不但使我們可以更深入的了解腫瘤轉移的機理，更重要的是，它們有可能成為預測腫瘤患者預后的指

3、標，并成為抗腫瘤轉移的靶點，為人類攻克腫瘤難題帶來希望。 Ezrin蛋白就是被發(fā)現(xiàn)與腫瘤細胞轉移密切相關的蛋白分子之一。已有研究證實它在多種腫瘤組織中表達，其中大部分與患者不良預后相關。 Ezrin蛋白是連接于細胞膜和細胞骨架之間的ERM 蛋白家族(Ezrin，Radixin，Moesin，Merlin)成員之一，即是一種將細胞膜分子(如CD44、E-cadherin、ICAM22)與肌動蛋白-細胞骨架連接起來的橋接蛋白。這種連

4、接，不但是結構上的，而且是功能上的。通過介導細胞膜與細胞骨架的連接，ezrin( ERM 家族) 在細胞的運動、遷移、有絲分裂和信號轉導等生理功能中發(fā)揮重要作用。 Yu 等和Khanna 等在兩個獨立的研究中，均采用了基因芯片這種大通量篩查差異基因表達的方法，并選用了兩種間葉來源腫瘤的、高低轉移能力各不相同的細胞系作為實驗對象。通過運用不同的數(shù)據處理方法，共同發(fā)現(xiàn)了ezrin這種與腫瘤轉移高度相關的蛋白。Yu等將vi12基因(e

5、zrin編碼基因)轉入低轉移能力的細胞系，發(fā)現(xiàn)原來不會轉移的腫瘤細胞轉移能力大大提高，很容易形成肺轉移灶，這說明ezrin蛋白的過表達可賦予腫瘤細胞高轉移活性。更重要的是，在這兩個研究中，都采用了諸如RNA干擾、發(fā)夾RNA、反義RNA等抑制ezrin表達的方法，結果兩組研究均顯示，在抑制了ezrin的表達后，原本具有高轉移能力的細胞系轉移能力大大下降，不能形成肉眼轉移灶。這些實驗結果表明，ezrin 不但足以導致腫瘤轉移，而且對于腫瘤轉

6、移是必不可少的。 Ezrin 是否在腫瘤轉移過程中發(fā)揮核心作用，目前尚不得而知，但是它參與多種不同來源腫瘤轉移的事實，已通過大量實驗得以證實．在大規(guī)模隨訪的基礎上，利用實時定量PCR的方法，研究ezrin與骨肉瘤行保肢手術患者生存期之間的關系。初步結果顯示，ezrin 的表達與患者生存期存在一定程度的負相關關系。并且在婦科腫瘤、胰腺癌、黑色素瘤、肺癌、高度惡性軟組織肉瘤、食管癌等腫瘤中，ezrin的過量表達已被證實與腫瘤的轉移有

7、關。但有關Ezrin在鼻咽癌組織中的表達及其對腫瘤生物學行為的影響的文獻報道很少。 本實驗旨在探討ezrin蛋白在鼻咽癌組織中的表達，深入研究ezrin表達水平與患者轉移和無病生存的關系，從臨床應用角度探索ezrin 成為鼻咽癌復發(fā)或者轉移的分子標志物的價值。 2．方法: 2.1臨床資料 回顧性研究中山大學腫瘤防治中心1999年1月至2003年1月鼻咽癌根治治療結束獲完全緩解病例105例，病理診斷均為鼻咽

8、未分化型非角化癌。搜集臨床資料：性別、年齡、EBV感染血清學指標、臨床分期、治療情況等。隨訪患者預后，結果包括了發(fā)生轉移或復發(fā)的患者51例，無轉移54例。 2.2免疫組化 我院病理科標本庫搜集對應標本；采用免疫組化SP法檢測隨訪患者原發(fā)病灶中ezrin表達情況，對組織表達情況評分。 2.3整理數(shù)據 統(tǒng)計分析應用SPSS 13.0統(tǒng)計軟件包進行統(tǒng)計。Ezrin不同表達水平與患者隨訪過程中出現(xiàn)轉移或復發(fā)等預后

9、的相關性采用Spearman 等級相關分析及等級秩和檢驗。Ezrin蛋白表達與隨訪的患者無病生存時間的關聯(lián)性采用Kaplan-Mcicr法分析及制圖。分期及病毒血清學滴度不同的兩組間ezrin表達差異比較采用x<'2>檢驗。多因素對預后的影響采用Cox回歸模型分析。 3．結果: 3.1 Ezrin蛋白表達與隨訪期間發(fā)生轉移的關系 Ezrin強陽性、陽性表達的患者遠處轉移率(分別為66.6﹪，52.8﹪)顯著高于e

10、zrin陰性的患者的轉移復發(fā)率(24.2﹪)，并且出現(xiàn)轉移的患者相對于無疾病生存的患者，存在更高幾率的ezrin蛋白過表達。 3.2 Ezrin蛋白表達與無病生存時間的關系 Ezrin蛋白陰性表達的患者平均無病生存時間65個月；陽性表達平均無病生存時間約49月；而ezrin強陽性表達患者平均無病生存時間為39月。三組患者無病生存率比較，總體差異顯著，其中異常表達組的生存時間短于陰性組，兩組差異有統(tǒng)計學意義。 3.

11、3 Ezrin蛋白表達與患者總生存率的關系 在隨訪結束后我們共獲得了75例患者長期(5年或以上)生存資料，這些患者腫瘤組織ezrin陰性表達24例，死亡6例，5年總生存率75﹪；陽性表達25例，死亡10例，5年總生存率約60﹪；而ezrin強陽性表達26例中死亡14例，5年總生存率46﹪。其中ezrin強表達組的總生存率明顯低于陰性組，兩組差異有統(tǒng)計學意義。 3.4 輔助治療對ezrin蛋白表達與轉移關系的影響

12、在未接受過放療以外的輔助治療的人群中，ezrin異常表達的患者遠處轉移率仍顯著高于ezrin陰性的患者(58.8﹪Vs.20.8﹪)，差異有統(tǒng)計學意義。對于采取聯(lián)合放化療的綜合治療策略的患者，盡管就遠處轉移率而言，ezrin異常表達的患者組仍高于無表達組，但差異己無統(tǒng)計學意義。 3.5 Ezrin蛋白表達與臨床分期、EB病毒血清學指標的關系 Ezrin蛋白異常表達與患者臨床疾病分期以及EB病毒血清學標志包括EBVDNA-

13、Ab中和率、VCA-IgA、EA-IgA滴度無明顯相關性。但我們發(fā)現(xiàn)，臨床局部晚期(Ⅲ，Ⅳa期)合并腫瘤組織ezrin蛋白陰性表達的25例病例在隨訪中有24﹪發(fā)生了遠處器官轉移(6/25)；相對比的是，晚期且腫瘤內ezrin高表達的30例在隨訪中有67﹪出現(xiàn)了局部復發(fā)或遠處轉移(20/30)，兩者差異顯著。 3.6 影響患者無病生存時間的多因素分析 采用Cox回歸模型對可能影響患者無病生存的多個因素進行分析，這些因素包括

14、年齡、TNM分期、T分期、N分期、EB病毒血清學標志EN-Ab、VCA-IgA以及ezrin蛋白。結果ezrin蛋白表達與患者無病生存具有獨立相關性(P<0.05)。 4．結論: 4.1 腫瘤組織中ezrin蛋白的異常表達與鼻咽癌患者治療結束后發(fā)生復發(fā)轉移及生存時間相關，通過對腫瘤組織中該蛋白的免疫組化檢測有可能預測患者預后。 4.2 輔助治療，特別是1-3個療程的化療對ezrin異常表達患者不良預后有一定的干預