SAHA對(duì)TGF-β誘導(dǎo)人胚肺成纖維細(xì)胞向肌成纖維細(xì)胞轉(zhuǎn)化的影響.pdf

1、目的：探討在轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β1(TGF-β1)刺激下，組蛋白去乙酰化酶抑制劑辛二酰苯胺異羥肟酸（SAHA）對(duì)人胚肺成纖維細(xì)胞系HELF向肌成纖維細(xì)胞(MF)分化的影響，從而為其用于治療IPF提供理論依據(jù)。
　　方法：實(shí)驗(yàn)分為對(duì)照組，TGF-β1組（5ng/mL）和不同濃度SAHA處理組（0.5，2，5μM）。體外培養(yǎng)HELF細(xì)胞，用5ng/mL TGF-β1和5μM SAHA共同刺激24h，觀察處理前后細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化情況，以探討

2、SAHA對(duì) HELF向肌成纖維細(xì)胞（MF）轉(zhuǎn)分化過(guò)程的影響； HELF細(xì)胞先用TGF-β1刺激24h，隨后加入0.5，2，5μM SAHA共孵育24h，MTT法檢測(cè)細(xì)胞的增殖情況，Western blot檢測(cè)α-SMA表達(dá)，比色法測(cè)量羥脯氨酸的含量，天狼猩紅染色分析總膠原含量，以及RT-PCR檢測(cè)I、Ⅲ型前膠原的mRNA表達(dá)水平。
　　結(jié)果：
　　1.正常對(duì)照組的細(xì)胞呈長(zhǎng)梭形，呈一定的弧形生長(zhǎng)，胞核較大，成卵圓形且多居中。經(jīng)

3、 TGF-β1作用后，細(xì)胞密度明顯增加，呈漩渦狀、放射性生長(zhǎng)。當(dāng)HELF細(xì)胞經(jīng)5μM SAHA共同孵育后，細(xì)胞間隔增寬，突起縮短，細(xì)胞質(zhì)減少。
　　2.HELF細(xì)胞經(jīng)TGF-β1作用后，其增殖活性顯著增高。當(dāng)給予5μM SAHA處理后，細(xì)胞增殖率減少了29.5％，與TGF-β1組相比，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　3.對(duì)照組羥脯氨酸表達(dá)極低，TGF-β1處理后，羥脯氨酸含量顯著增高。當(dāng)用0.5，2，5μM SAHA處理后，羥脯氨

4、酸含量隨著SAHA濃度的增加而減少。
　　4.對(duì)照組中幾乎無(wú)α-SMA蛋白表達(dá)，TGF-β1處理后α-SMA水平顯著增高，而SAHA能有效降低α-SMA的水平。
　　5.TGF-β1組（B組）總膠原含量顯著高于對(duì)照組。0.5，2，5μM SAHA處理后，膠原含量隨劑量的增加而減少。
　　6.SAHA孵育24h后，能夠明顯抑制TGF-β1刺激后的細(xì)胞表達(dá)I型和III型前膠原蛋白mRNA，并且具有明顯的劑量依賴(lài)性。