脂肪干細胞移植對大鼠腦出血模型細胞凋亡的影響.pdf

1、干細胞是體內(nèi)存在的一類具有可以自我更新，同時具有多向分化潛能的特殊細胞。隨著近期組織工程和基因治療技術(shù)的研究進展，尋找合適的種子細胞及細胞替代治療已成為當(dāng)前生命科學(xué)研究的熱點，胚胎干細胞與神經(jīng)干細胞的發(fā)現(xiàn)為神經(jīng)修復(fù)開辟了一個有效途徑，并且對中樞神經(jīng)系統(tǒng)退行性疾病治療采取的細胞替代治療即細胞移植已取得療效肯定。但是無論是胚胎干細胞還是神經(jīng)干細胞都存在著取材來源少，耗材多，生長繁殖慢等缺點以及受法律、道德、倫理的限制，制約它們的發(fā)展及應(yīng)用。

2、 骨髓基質(zhì)細胞來源于中胚層間充質(zhì)多能干細胞，具有自我復(fù)制及多向分化潛能。骨髓基質(zhì)細胞移植研究日益深入，己應(yīng)用于臨床治療心肌梗塞，并且移植到腦內(nèi)可改善神經(jīng)退行性疾病的神經(jīng)功能。然而骨髓基質(zhì)細胞獲取時需通過麻醉后抽取骨髓或取肋骨，給病人帶來痛苦，獲取數(shù)量有限，培養(yǎng)時間長等問題限制其發(fā)展。 脂肪組織與骨髓一樣來源于中胚層，脂肪間充質(zhì)干細胞量多且可以多向分化。脂肪組織可以自體抽取，來源豐富，可自體細胞移植，無免疫排斥反應(yīng)，避免疾

3、病傳播，是干細胞生物工程研究的理想來源。 目的： 本實驗應(yīng)用酶消化法，對SD大鼠腹股溝脂肪組織間充質(zhì)干細胞分離培養(yǎng)，ADSC大鼠腦內(nèi)出血模型移植后進行神經(jīng)功能測評，觀察ADSC腦內(nèi)移植后腦內(nèi)血腫周圍神經(jīng)細胞凋亡的情況，探討ADSC腦內(nèi)移植對腦內(nèi)血腫周圍神經(jīng)細胞凋亡的影響及機制。 方法： 脂肪干細胞培養(yǎng)、增殖、鑒別及誘導(dǎo)健康成年Sprague-Dawley(S-D)大鼠，過量麻醉處死，無菌條件下取腹股溝脂肪

4、，用PBS反復(fù)沖洗，膠原酶消化脂肪組織進行ADSC分離培養(yǎng)。對ADSC在體外進行傳代培養(yǎng)，觀察其增殖能力。對培養(yǎng)的脂肪干細胞進行成脂誘導(dǎo)。 脂肪干細胞的腦內(nèi)移植： 在立體定向儀定位下行SD大鼠右側(cè)尾狀核腦內(nèi)血腫模型制作。Ⅱ-Ⅲ代ADSC在立體定向儀定位下行右側(cè)腦室內(nèi)移植。約106個細胞，細胞懸液約10ul。緩慢注入右側(cè)腦室。 腦出血模型ADSC腦內(nèi)移植后神經(jīng)功能測評比較采用longa等的5分評分法觀察模型組、對照

5、組、移植組3天、1周、2周、3周、4周神經(jīng)功能測評。 ADSC腦內(nèi)移植后Tunel染色： 將ADSC腦內(nèi)移植3天、1周、2周、3周、4周后按時間點捕殺大鼠，灌注后取腦標本，送病理科制切片，行Tunel染色，觀察腦出血灶周圍凋亡細胞。 結(jié)果： 脂肪組織經(jīng)膠原酶消化，接種細胞24小時后貼壁生長，原代培養(yǎng)7-10天，即達70-80％融合。2-4天細胞可再次傳代。經(jīng)過頻繁換液、傳代，細胞得以純化。加入成脂誘導(dǎo)培養(yǎng)

6、基誘導(dǎo)2-4天后培養(yǎng)液就出現(xiàn)含脂滴的細胞。對照組培養(yǎng)后未見脂肪細胞形成。 大鼠腦出血模型內(nèi)移植ADSC后神經(jīng)功能改善明顯，對照組模型組無差異，而移植組與模型組，移植組與PBS組間差異有統(tǒng)計學(xué)意義。 大鼠腦出血模型腦內(nèi)移植ADSC組腦出血周圍凋亡細胞數(shù)小于模型組，從第3天開始隨時間增加凋亡數(shù)越來越少。 結(jié)論： 1.從S-D大鼠腹股溝脂肪組織中可分離、培養(yǎng)出ADSCs。ADSCs在10％FBS的低糖DMEM培