胚胎神經(jīng)干細(xì)胞腦出血大鼠腦內(nèi)移植的運(yùn)動神經(jīng)功能改變和形態(tài)學(xué)研究.pdf

1、目的： 從E14SD胎鼠前腦分離出神經(jīng)干細(xì)胞，體外培養(yǎng)到一定的數(shù)量供細(xì)胞移植；在大鼠尾狀核注射膠原酶Ⅳ，制作腦出血模型；將培養(yǎng)成功的神經(jīng)干細(xì)胞進(jìn)行熒光標(biāo)記后，移植入腦出血模型大鼠腦內(nèi)，觀察大鼠腦出血后神經(jīng)功能的恢復(fù)以及移植后分化神經(jīng)元和膠質(zhì)細(xì)胞的形態(tài)學(xué)改變。 方法； 一.參照葉盛的差速離心法培養(yǎng)出神經(jīng)干細(xì)胞，在相差顯微鏡下觀察神經(jīng)干細(xì)胞的生長及分化形態(tài)；nestin免疫熒光方法來鑒定神經(jīng)干細(xì)胞，用map2標(biāo)記神經(jīng)

2、元及GFAP標(biāo)記星形膠質(zhì)細(xì)胞方法來確定神經(jīng)干細(xì)胞的分化能力。 二.使用大鼠立體定向儀在大鼠尾狀核注射膠原酶Ⅳ，制作腦出血模型大鼠；從大體解剖、組織病理及神經(jīng)功能學(xué)三個方面來評價模型：大體標(biāo)本觀察血腫形態(tài)，HE染色法顯示血腫的分布，對偏癱大鼠進(jìn)行肢體的功能評價。 三.如上述方法制作的34只腦出血大鼠模型，隨機(jī)分為三組，進(jìn)行神經(jīng)干細(xì)胞移植入腦出血大鼠腦內(nèi)的實(shí)驗(yàn)研究。 A組：10只為空白組，不移植神經(jīng)干細(xì)胞及培養(yǎng)液。

3、 B組：10只為培養(yǎng)液移植組，在腦出血3天后移植培養(yǎng)液。 C組：14只為神經(jīng)干細(xì)胞移植組，在腦出血3天后移植神經(jīng)干細(xì)胞，移植前用核熒光標(biāo)記物Hoechst33342標(biāo)記神經(jīng)干細(xì)胞細(xì)胞核(4只通過免疫熒光觀察細(xì)胞在大鼠體內(nèi)生長及分化情況，10只用于肢體功能評價)。 三組大鼠，每組10只，分別在移植前1h，移植后7天，14天，21天， 28天進(jìn)行神經(jīng)功能學(xué)評分，經(jīng)統(tǒng)計學(xué)分析，判斷神經(jīng)干細(xì)胞在腦出血大鼠腦內(nèi)移植后

4、是否能促進(jìn)偏癱肢體功能恢復(fù)。 結(jié)果: 在培養(yǎng)過程中，觀察到神經(jīng)干細(xì)胞增殖形成大量神經(jīng)球懸浮生長，nestin免疫熒光標(biāo)記證實(shí)為神經(jīng)干細(xì)胞，經(jīng)誘導(dǎo)分化后map2或者GFAP和hoechst雙染可見陽性細(xì)胞，表明神經(jīng)干細(xì)胞能進(jìn)一步分化為神經(jīng)元及星形膠質(zhì)細(xì)胞：膠原酶Ⅳ制作腦出血模型腦內(nèi)血腫邊界清楚、形態(tài)規(guī)則，肢體功能障礙明顯；hoechst標(biāo)記的神經(jīng)干細(xì)胞移植入腦出血大鼠后可見其在腦內(nèi)存活，主要分布于血腫腔周邊，免疫熒光檢測顯

5、示移植細(xì)胞能進(jìn)一步分化為神經(jīng)元及星形膠質(zhì)細(xì)胞；從移植術(shù)后第21天到第28天，神經(jīng)干細(xì)胞移植組大鼠的神經(jīng)功能改善顯著好于培養(yǎng)液移植組和單純腦出血組，有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.001)。 結(jié)論： 1.用差速離心法能從E14胎鼠前腦皮質(zhì)中成功分離和培養(yǎng)出有效數(shù)量的神經(jīng)干細(xì)胞； 2.膠原酶Ⅳ制作的腦出血大鼠是一種重復(fù)性好、穩(wěn)定性佳的腦出血模型； 3.胚胎神經(jīng)干細(xì)胞腦出血大鼠腦內(nèi)移植能促進(jìn)偏癱肢體功能恢復(fù)； 4