硫代反義寡核苷酸在鴨體內外對DHBV DNA復制的影響及高通量熒光底物HIV-1蛋白酶模型的建立.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、人類免疫缺陷病毒(HIV)和人乙型肝炎病毒(HBV)感染是目前對人類威脅最大的兩種病毒性傳染病.HIV在感染后,經過至多十年的潛伏期后,會發(fā)展成獲得性免疫缺陷綜合征(AIDS),絕大多數(shù)患者最終會由于并發(fā)各種感染或腫瘤而死亡;人乙型肝炎病毒可使患者長期處于低生活質量的狀態(tài),后期患者可發(fā)生肝硬化肝癌等病變,最終影響到人們的生存.本論文分兩部分針對這兩種病毒的化療,即應用硫代反義寡核苷酸抑制肝炎病毒和采用化學合成藥物抑制HIV蛋白酶進行了研

2、究.首先,以鴨乙型肝炎病毒(DHBV)為模型,研究在DHBV DNA轉錄起始區(qū)域設計硫代反義寡核苷酸抑制DHBV DNA復制的可行性.設計合成了分別基于DHBV PreS1、PreS2、S抗原啟動基因的硫代反義寡核苷酸,經OPC柱純化后,用于效果鑒定.應用Southern blot實驗和cpm計數(shù)測定其對原代鴨肝細胞中及雛鴨中感染DHBV的DHBV DNA的作用.結果表明在1.5μmol/L濃度下,體外抑制率分別是61.5%,69.3%

3、和62.4%.選取PreS1抗原基因起始區(qū)段的硫代反義寡核苷酸進行大量合成,經Sephadex G-25柱純化后用于整體動物實驗.每只動物每天按10 μ g/g體重靜脈注射一次,共給藥6天.對動物肝臟進行取樣分析表明,在此劑量下,對DHBV DNA的抑制率可達87.9%.由于目前蛋白酶抑制劑被證明是抗HIV的較為有效的藥物.通過將p 100w表達載體轉化入E.coli細菌細胞,在IPTG作用下,使其表達出包涵體形式的HIV蛋白酶融合蛋白

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