可調控的煙草葉綠體轉基因表達體系研究.pdf

1、山東大學碩士學位論文可調控的煙草葉綠體轉基因表達體系研究姓名：李朔申請學位級別：碩士專業(yè)：遺傳學指導教師：侯丙凱胡贊民20050507由東大學確士擎搜論文摘要利用葉綠體轉蒸因技術，有可能在高等植物葉綠體中黼教表達外源蛋白，與核轉優(yōu)技術相比較，有表達效率贏，安全性好、可贏接表達鰓梭基因等特點和優(yōu)點。但同細胞核轉基因一樣葉綠體轉纂因也存在抗生素標記的生物安壘性和外潺基因的過蠢表達對植物最常生長發(fā)育的影響的問題。率論文對在煙草中建立轅矮互捧酶

2、時綠倭表述體系迸囂了探索。羧質豆作鮑峙綠體表達伴系的建立是潮時對媧革豹許綠俸熬禹綴和撩基因筑迸彳亍轉純，簌棱蕊因緞中轉入己酵誘等型襄動子(AIc襄動子)寇動下的T7R融聚合酶基因，面農時綠體孛轉入w患動芋啟動下妁，澡基醫(yī)(GUS或納要激酶腿，。遮樣。瓢可班實現外源基因在時綠體牛的舞效表達叉能耐其進行人芏調控，藤雖舉襄影魄攘撩孵正常生長。在零論文中，蘺先撒煙草進符7核基因綴轉化，轉入包岔Alc啟動子的”RNA聚臺酶基因表：逸盒，對轉化植株

3、進行了PCR和基嗣組Southernblot檢鍘和RT_PcR檢測證明了外源然因的插入和表達。其次，構建了兩個煙草葉綠體表達載伴和兩個葛蕊旰綠體表達載體，它們分鬟包括斕草和萵葭的時綠體同源片段、不弼井源基鞠《GUS和A黔的禽T7精動子的裘達盎以及篩選標記基因BA潮的盱綠律表達盎，并對胼構熊羲體中豹BADH表達盒在大腸稈蕾中的表達逃學了酶活檢測。最后，懲梅建的時綠侮表達載體秘賽驗室甚宥撼以8蒯坶篩選標記羹囂靜煙革蜂綠體表這載俸分嬲對野生鷲

4、煙草稚T7RNA聚合懿按轉純煙草進行時綠體轉化，得到抗性植橡，著對轉純的綣果迸行了分據。論文中還對非抗生索篩選標記基因BADH在煙萆葉綠體轉化中的應用進行了嘗試t得到了一拙魏菜堿醛抗性和PCR辯蛙轉化植撩，井初步褥出了箕應用有局限性的結論。在論文的第=部分巾，發(fā)現了化合物甜菜堿醚對組織培葬中萵苣分化再生的促進作用實驗證明。在培養(yǎng)基中添加適當濃魔(5raM)的甜菜堿醛可以顯著增強蘺苣分仡褥生麓力，其愈傷組織誘替率和分純率分割提商293％和