MMP-1在牙根吸收發(fā)生機制中的作用及其調(diào)控的初步研究.pdf

1、金屬基質(zhì)蛋白酶-1（matrixmetalloproteinases-1,MMP-1）作為金屬蛋白激酶家族中一員能在正畸力作用下啟動膠原纖維分解斷裂這一過程,以達到清除牙周膜（PeriodontalLigament，PDL）中膠原纖維的目的，而這一過程無論對于正畸過程中牙槽骨的吸收、改建，還是牙根吸收發(fā)生都是重要機制環(huán)節(jié)。在機械力介導(dǎo)下的正畸過程中，牙周膜成纖維細胞（HPDLF）的作用是非常活躍的，具有分泌等多種潛能，與牙槽骨的改建等活

2、動密切相關(guān)。那么，HPDL是否具有分泌MMP-1功能，這種分泌功能的調(diào)節(jié)機制如何？基于研究正畸過程中牙根吸收的發(fā)生機制和防治策略的需要，本研究針對上述問題從以下三個方面進行了初步研究。
　　1.MMP-1在體外培養(yǎng)的人牙周膜成纖維細胞中的表達
　　目的：在基因和蛋白水平上檢測體外培養(yǎng)的人牙周膜成纖維細胞（humanperiodontalligamentfibroblast，HPDLF）對金屬基質(zhì)蛋白酶-1（matrixmet

3、alloproteinases-1,MMP-1）的表達情況。方法：收集4-6代體外培養(yǎng)的HPDL細胞，用逆轉(zhuǎn)錄——聚合酶鏈反應(yīng)（RT-PCR）測定MMP-1的蛋白含量和mRNA表達量；2.取細胞外液用免疫印跡法（Westernblot）方法檢測MMP-1蛋白表達。結(jié)果：RT-PCR結(jié)果和Westernblot結(jié)果均證明：在HPDLFs中，MMP-1的蛋白和基因上均有表達。結(jié)論：體外培養(yǎng)的PDL具有分泌MMP-1的功能。
　　2.牙

4、根吸收相關(guān)因子對MMP-1在體外培養(yǎng)的人牙周膜細胞中的表達的影響
　　目的：探討牙根吸收相關(guān)因子，如腫瘤壞死因子α(tumornecrosisfactor,TNF-α)白介素-6(IL-6)對體外培養(yǎng)的人牙周膜成纖維細胞產(chǎn)生MMP-1的影響,從而分析MMP-1在牙根吸收機制中的作用。方法：采用免疫印跡法和逆轉(zhuǎn)錄——聚合酶鏈反應(yīng)分別檢測體外培養(yǎng)的HPDLFs經(jīng)0ng/ml(對照組)、0.01ng/ml、0.02ng/ml、0.03n

5、g/ml、0.04ng/mlTNF-α處理12h；經(jīng)0ng/ml(對照組)；0.02ng/ml；0.04ng/ml；0.06ng/ml；0.08ng/mlIL-6處理24h后,細胞產(chǎn)生MMP-1的蛋白含量和mRNA表達量的變化。結(jié)果：運用免疫印跡法和逆轉(zhuǎn)錄——聚合酶鏈反應(yīng)研究均發(fā)現(xiàn)經(jīng)不同濃度的TNF-α和IL-6處理的細胞在mRNA和上清液中活性蛋白水平均能增加MMP-1的表達。兩個實驗組MMP-1的表達量均隨刺激因子的濃度增高而逐步升

6、高，直至到達頂峰之后，又隨著濃度增加呈現(xiàn)下降趨勢。結(jié)論：適量TNF-α、IL-6可以促進HPDLF分泌MMP-1，提示HPDLF中MMP-1表達增加可能是牙根吸收發(fā)生的生物學機制之一。
　　3.中藥天花粉蛋白(TCS)對牙根吸收相關(guān)因子介導(dǎo)的MMP-1在體外培養(yǎng)的人牙周膜細胞中過表達的影響
　　目的：探討中藥天花粉蛋白（TCS）對牙根吸收相關(guān)因子介導(dǎo)的MMP-1在體外培養(yǎng)的人牙周膜細胞中過表達的影響，以期能夠基于這種物質(zhì)建立

7、以一種抑制正畸過程中牙根吸收的生物學治療途徑。方法：對HPDLF進行體外培養(yǎng),分成A，B，C，D，E五組：A組；空白對照組；B組：只加入刺激因子TNF-α(濃度為0.03ng/ml)；C組：加入刺激因子TNF-α+TCS（TNF-α濃度為0.03ng/ml；TCS濃度為0.03ng/ml）；D組：只加入刺激因子IL-6（濃度為0.06ng/ml）；E組：加入刺激因子IL-6+TCS（IL-6濃度為0.06ng/ml；TCS濃度為0.05

8、ng/ml）對HPDL分別進行刺激，24h后分別應(yīng)用免疫印跡法和逆轉(zhuǎn)錄——聚合酶鏈反應(yīng)測定上述五個實驗組中MMP-1的蛋白含量和mRNA表達量。后用流式細胞儀對經(jīng)過TCS（濃度為0.05ng/ml）處理后的細胞與對照細胞進行測定，分析比較TCS對人牙周膜細胞生長狀態(tài)的影響。結(jié)果：結(jié)合TCS作用，可使TNF-α及IL-6介導(dǎo)的MMP-1在體外培養(yǎng)的人牙周膜細胞中過表達作用受到抑制。結(jié)論：TCS可以抑制HPDLF在牙根吸收相關(guān)因子作用下出現(xiàn)