具殺線蟲活性植物內(nèi)生細菌和根際放線菌的篩選及防效研究.pdf

1、植物寄生線蟲是危害植物的重要病原物,為了篩選到對植物寄生線蟲具有較高殺線蟲活性的植物內(nèi)生細菌和植物根際放線菌。本研究進行了內(nèi)生細菌殺線蟲活性菌株的分離、篩選和鑒定,并對其中活性最強的菌株進行了發(fā)酵條件的優(yōu)化；研究了內(nèi)生細菌和根際放線菌發(fā)酵產(chǎn)物殺線蟲物質(zhì)的穩(wěn)定性；還研究了內(nèi)生細菌和放線菌對根結(jié)線蟲的防治效果,以及內(nèi)生細菌和放線菌復配對根結(jié)線蟲的防治效果；結(jié)果如下:
　　 1.采用組織分離法從6種植物中分離篩選出112株內(nèi)生細菌,用

2、黃瓜無菌苗定殖量測定法篩選得到64株能穩(wěn)定定殖的菌株。以松材線蟲為靶標,用直接觸殺法進行篩選,從這64株能穩(wěn)定定殖的菌株中篩選得到13株對松材線蟲具有較高殺線蟲活性的植物內(nèi)生細菌,這些菌株的發(fā)酵上清液對松材線蟲處理24h.殺線蟲率均達到了100％；其中BCM2、SZ5、CCM7和DP1這4個菌株的殺線蟲活性較高,發(fā)酵上清液稀釋3倍處理24h殺線蟲率均達到95％以上,DP1和SZ5菌株達到了100％；并發(fā)現(xiàn)部分菌株發(fā)酵液能使線蟲蟲體發(fā)生滲

3、漏或消解。
　　 2.同時本文還對土壤中分離得到的326株放線菌進行了殺線蟲活性的篩選,得到了21株具有殺線蟲活性的放線菌,這21株放線菌的發(fā)酵上清液對松材線蟲的24h處理死亡率均達到了80％以上,其中有8株放線菌發(fā)酵液的殺線蟲活性達到了100％,而且部分菌株也能產(chǎn)生使線蟲消解的物質(zhì)。經(jīng)過對其中16株活性較高的放線菌進行復篩,得到了五株活性較好的放線菌,分別為:NK17、NK19、NK27、NK29和V21。
　　 3.

4、采用生理生化鑒定和16SrDNA序列測定方法鑒定了4株高活性植物內(nèi)生細菌的歸屬種類,結(jié)果鑒定DP1和CCM7為枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis),BCM2和SZ5是蠟樣芽孢桿菌(Bacillus cereus)。
　　 4.經(jīng)過殺線蟲代謝物質(zhì)的理化性質(zhì)的研究和發(fā)酵液中殺線蟲活性物質(zhì)的穩(wěn)定性測定,證明5株放線菌產(chǎn)生的殺線蟲物質(zhì)均是一種可以揮發(fā)的小分子堿性物質(zhì)；4株植物內(nèi)生細菌產(chǎn)生的物質(zhì)是一種對蛋白酶穩(wěn)定、耐熱不耐酸

5、堿且長時間保藏活性不下降的小分子肽類物質(zhì)。
　　 5.采用單因素法測定4株植物內(nèi)生細菌發(fā)酵產(chǎn)生殺線蟲物質(zhì)的最佳碳氮源,并對這4株高活性植物內(nèi)生細菌菌株采用正交實驗法優(yōu)化發(fā)酵條件,結(jié)果表明這4株植物內(nèi)生細菌產(chǎn)生殺線蟲物質(zhì)的最佳碳源是蛋白胨,最佳氮源是牛肉膏,正交優(yōu)化后使發(fā)酵液殺線蟲效果提高了4倍。
　　 6.用盆栽苗灌根法研究了活性放線菌和植物內(nèi)生細菌對根結(jié)線蟲的防治效果以及放線菌和內(nèi)生細菌的復合防效。放線菌對番茄根結(jié)線蟲

6、的防效結(jié)果較好的是NK29和NK17,分別為38.17％和37.63％；而供試的7株植物內(nèi)生細菌中除DP1外的6株植物內(nèi)生細菌對番茄根結(jié)線蟲均有一定的防治效果,其中BCM2和DP24對番茄根結(jié)線蟲的防治效果較好,分別為57.35％和50％,其次為CCM7和DLJ1。將BCM2和CCM7分別進行對番茄根結(jié)線蟲的治療實驗和防治實驗,結(jié)果表明這兩株內(nèi)生細菌對番茄根結(jié)線蟲病的治療結(jié)果并不理想,但是對于防治根結(jié)線蟲卻有一定的效果。放線菌和內(nèi)生細菌

7、復配防效結(jié)果表明:在不影響植株長勢的情況下,對根結(jié)線蟲有抑制作用的菌株復配方式為BCM2+NK17和CCM7+NK29,這兩種復配方式下植株的長勢均與阿維菌素處理組相當,且優(yōu)于清水對照處理組,對根結(jié)線蟲的防效分別為57.81％和37.89％。
　　 本研究從菌種篩選到產(chǎn)物性質(zhì)鑒定再到防效的測定,一系列結(jié)果均證明土壤中和經(jīng)濟作物體內(nèi)均存在一定數(shù)量的能產(chǎn)生殺線蟲活性物質(zhì)的放線菌和植物內(nèi)生細菌,其中一些細菌產(chǎn)生的殺線蟲物質(zhì)具有較強的穩(wěn)