Bt基因與GNA基因融合基因的構建、表達及其生物活性研究.pdf_第1頁
已閱讀1頁,還剩78頁未讀, 繼續(xù)免費閱讀

下載本文檔

版權說明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內容提供方,若內容存在侵權,請進行舉報或認領

文檔簡介

1、水稻在生長過程中受到多種害蟲的危害,蘇云金芽孢桿菌(Bacillus thuringiensis,Bt)是目前應用最多的殺蟲微生物。自從1987年報道第一例轉基因作物以來,已經(jīng)有很多水稻品系轉入了各種Bt cry基因,并能對鱗翅目害蟲表現(xiàn)出抗性。但尚沒有發(fā)現(xiàn)一種Bt基因對水稻同翅目重要害蟲如褐飛虱(Nilaparvata lugens)等有殺蟲活性。同時,害蟲可能會對Bt產(chǎn)生抗性。盡管還沒有在大田實驗中害蟲表現(xiàn)對轉Bt水稻抗性的報道,但

2、在室內實驗中,已經(jīng)有害蟲表現(xiàn)出了對Cry蛋白的抗性。構建抗蟲融合基因會是一種新的有效的方法用以解決這些問題。
   雪花蓮外源凝集素(Galanthus nivalis agglutinin,GNA)是一種甘露糖專一識別的植物凝集素。研究表明人工喂食GNA和轉GNA作物都對飛虱表現(xiàn)出一定的毒力。所以,GNA為可以作為一個很好的候選基因用以和Bt構成融合基因。為此,本研究將Bt殺蟲蛋白CrylAc結構域Ⅰ部分基因序列與成熟GNA蛋

3、白基因序列進行融合,以期使其表達一種對鱗翅目和同翅目害蟲均具有良好抗蟲活性的新的殺蟲蛋白。獲得的主要研究結果如下:
   1.首先分別單獨克隆出CrylAc結構域Ⅰ部分基因序列與成熟GNA蛋白基因序列,再連接到克隆載體pCR2.1上,構建融合基因(CrylAc/GNA)。將融合基因克隆到原核表達載體pET11a上,即pET11a-CrylAc-GNA,再轉化大腸桿菌(Escherichia coli,E.coli)。結果顯示能夠

4、表達得到含有GNA成熟蛋白結構和CrylAc蛋白結構域Ⅰ的融合蛋白。經(jīng)凝血活性測定表明該融合蛋白具有凝血活性。另外,生物測定實驗也表明融合蛋白對褐飛虱仍保持有GNA蛋白應具有的殺蟲活性。
   2.設計引物從含有融合基因的pET11a載體上分別PCR擴增出融合基因、單獨的CrylAc基因和單獨的GNA基因,再連接到T載體上,轉化大腸桿菌E.coli。經(jīng)過檢驗測定后,將三個基因分別克隆到植物表達載體pCAMBIA1300s上,即構

溫馨提示

  • 1. 本站所有資源如無特殊說明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請下載最新的WinRAR軟件解壓。
  • 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請聯(lián)系上傳者。文件的所有權益歸上傳用戶所有。
  • 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁內容里面會有圖紙預覽,若沒有圖紙預覽就沒有圖紙。
  • 4. 未經(jīng)權益所有人同意不得將文件中的內容挪作商業(yè)或盈利用途。
  • 5. 眾賞文庫僅提供信息存儲空間,僅對用戶上傳內容的表現(xiàn)方式做保護處理,對用戶上傳分享的文檔內容本身不做任何修改或編輯,并不能對任何下載內容負責。
  • 6. 下載文件中如有侵權或不適當內容,請與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
  • 7. 本站不保證下載資源的準確性、安全性和完整性, 同時也不承擔用戶因使用這些下載資源對自己和他人造成任何形式的傷害或損失。

最新文檔

評論

0/150

提交評論