利用微陣列技術篩選大白豬和二花臉豬經產母豬排卵卵泡差異表達基因.pdf

1、繁殖性狀是非常重要的經濟性狀，產仔性能的高低直接影響?zhàn)B豬業(yè)的生產效益。本試驗選用繁殖力強的中國地方豬種代表二花臉豬和繁殖性能較差的國外豬種代表大白豬作為試驗動物，采用基因芯片技術，探討了經產二花臉豬和大白豬之間成熟卵泡基因表達量的變化。根據表達狀況和生理生化功能，選取BAX基因作為影響豬繁殖性能的候選基因。采用RT-PCR的方法進行部分差異表達基因的組織表達研究；利用直接測序的方法對所分離片段進行SNP檢測；以大白豬(273頭，383窩

2、)、中國瘦肉豬新品系DIV(128頭，220窩)為試驗材料，進行多態(tài)性與豬繁殖性能的相關性分析。結果有如下幾個方面：
　　 1.應用含23937條探針的Affymetrix豬全基因組寡聚核苷酸芯片檢測3頭大白豬和3頭二花臉豬成熟卵泡的差異表達基因。通過T檢驗，篩選出有統計學意義的差異表達的相關基因(P＜0.05)。結合fold倍數2倍以上的標準，發(fā)現差異表達的基因共有133個，其中，在二花臉豬種中表達上調的基因29個，包括BMP

3、R1B，H3F3A,MT-2B，ELA2等基因；表達下調的基因有104個，包括GALP,KIT,BAX,P53等基因。
　　 2.本試驗選取了8個基因作為待驗證基因，分別為：P53,BMPR1B,ITM2A，wIT1,H3F3A，LOC396850,CNN2,GALP。用實時定量PCR(real-timePCR)的方法驗證基因芯片結果的可靠性，結果證明7個基因(除CNN2基因外)的mRNA在芯片結果中和實時定量PCR結果中的表達

4、趨勢是一致的，兩種結果的相關性顯著，說明基因芯片的結果是可靠的。
　　 3.BAX基因：(1)獲得豬BAX基因第一內含子416bp的cDNA序列。(2)對所獲得的序列進行SNP檢測，應用PCR-RFLP技術，建立了豬BAX基因于119bp處的EarⅠ酶切分型技術。(3)分析結果表明：EarⅠ多態(tài)位點與農科院大白豬的頭胎總產仔數(TNB)、產活仔數(NBA)(P＜0.05,P＜0.01)顯著相關，基因加性效應差異顯著(P＜0.05