蛋白質的顏色反應

1、實驗 蛋白質的顏色反應,一、目的,二、原理,蛋白質分子中的某種或某些基團與顯色劑作用，可產生特定的顏色反應，不同蛋白質所含氨基酸不完全相同，顏色反應亦不同。顏色反應不是蛋白質的專一反應，一些非蛋白物質亦可產生相同顏色反應，因此不能僅根據(jù)顏色,掌握鑒定蛋白質的原理和方法。,反應的結果決定被測物是否是蛋白質。顏色反應是一些常用的蛋白質定性和定量測定的依據(jù)。重要的顏色反應有：,1.雙縮脲反應 將尿素加熱到180℃，則兩分子尿素縮合

2、成一分子雙縮脲，并放出一分子氨。雙縮脲在堿性溶液中能與硫酸銅反應產生紫紅色絡合物，此反應稱雙縮脲反應。蛋白質分子中含有許多和雙縮脲結構相似的肽鍵，因此也能起雙縮脲反應。通?？捎么朔磻獊矶ㄐ澡b定蛋白質，也可根據(jù)反應產生的顏色在540nm處比色，定量測定蛋白質。,2.蛋白質的黃色反應 是含有芳香族氨基酸特別是含有酪氨酸和色氨酸的蛋白質所特有的呈色反應。蛋白質溶液遇硝酸后，先產生白色沉淀，加熱則白色沉淀變成黃色，再加堿顏色加深呈橙黃色

3、，這是因為硝酸將蛋白質分子中的苯環(huán)硝化，產生了黃色硝基苯衍生物。例如皮膚、指甲和毛發(fā)等遇濃硝酸會變成黃色。3.米倫反應 米倫試劑為硝酸、亞硝酸、硝酸汞、亞硝酸汞的混合物，蛋白質溶液加入米倫試劑后即產生白色沉淀，加熱后沉淀變成紅色。,酚類化合物有此反應，酪氨酸含有酚基，故酪氨酸及含有酪氨酸的蛋白質都有此反應。4.茚三酮反應 蛋白質與茚三酮共熱，則產生藍紫色的還原茚三酮、茚三酮和氨的縮合物。此反應為一切氨基酸及α-氨基酸

4、所共有。含有氨基的其他物質亦呈此反應。,三、操作：,1.雙縮脲反應①取少許結晶尿素放在干燥試管中，微火加熱，尿素溶化并形成雙縮脲，釋出的氨可用,紅色石蕊試紙試之。至試管內有白色固體出現(xiàn)，停止加熱，冷卻。然后加10%NaOH 溶液1mL 混勻，觀察有無紫色出現(xiàn)。②另取一試管，加蛋白質溶液10滴，再加10% NaOH 溶液10滴及1%CuSO4溶液4滴，混勻，觀察是否出現(xiàn)紫玫瑰色。2.蛋白質的黃色反應 在一試管內，加蛋白質溶液1

5、0滴及濃硝酸3～4滴，加熱，冷卻后再加10%NaOH 溶液5滴，觀察顏色反應。3.米倫反應① 用苯酚做實驗：取0.5%苯酚溶液1mL 于,試管中，加米倫試劑約0.5mL，小心加熱，溶液即出現(xiàn)玫瑰紅色。② 用蛋白質溶液做實驗：取2mL 蛋白質溶液，加0.5mL 米倫試劑，此時出現(xiàn)蛋白質的沉淀(因試劑含汞鹽及硝酸之故)，小心加熱，凝固之蛋白質出現(xiàn)紅色。4.茚三酮反應 取1mL 蛋白質溶液置于試管中，加0.5mL茚三酮試劑，加