敲減長(zhǎng)鏈非編碼RNA ATB抑制膠質(zhì)瘤細(xì)胞增殖、遷移和侵襲.pdf

1、目的：
　　采用shRNA ATB敲減膠質(zhì)瘤U87細(xì)胞中ATB后，研究其對(duì)人膠質(zhì)瘤細(xì)胞增殖、遷移和侵襲的影響。
　　方法：
　　本研究采用實(shí)時(shí)定量PCR（qRT-PCR）方法檢測(cè)ATB在人膠質(zhì)瘤細(xì)胞系U87與正常人腦膠質(zhì)細(xì)胞HEB中的表達(dá)情況。并在此基礎(chǔ)上構(gòu)建了ATB表達(dá)載體shRNA ATB質(zhì)粒，利用構(gòu)建成功的質(zhì)粒轉(zhuǎn)染人膠質(zhì)瘤U87細(xì)胞株，獲取新的U87細(xì)胞，該細(xì)胞具有低表達(dá)ATB的特點(diǎn)。應(yīng)用MTT法檢測(cè)敲減ATB后

2、對(duì)U87細(xì)胞增殖的影響；應(yīng)用細(xì)胞克隆實(shí)驗(yàn)檢測(cè)敲減ATB后對(duì)U87細(xì)胞克隆增殖能力的影響；應(yīng)用Transwell實(shí)驗(yàn)檢測(cè)敲減ATB后對(duì)U87細(xì)胞遷移和侵襲能力的影響。應(yīng)用Western blot法檢測(cè)敲減ATB后PCNA蛋白表達(dá)情況。
　　結(jié)果：
　　qRT-PCR結(jié)果顯示，人腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞系U87中ATB表達(dá)水平與正常人腦膠質(zhì)細(xì)胞 HEB相比，較之明顯上調(diào)（P<0.01）；與 shRNA正常對(duì)照組相比，轉(zhuǎn)染了shRNA-ATB

3、的實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞能的ATB水平顯著較少（P<0.01）；細(xì)胞克隆實(shí)驗(yàn)顯示shRNA-ATB實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞克隆形成能力較 shRNA對(duì)照組明顯降低（P<0.01）； MTT結(jié)果表明敲減細(xì)胞內(nèi)ATB后細(xì)胞增殖的速率較shRNA對(duì)照組有明顯的較低（P<0.01）。Transwell實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步驗(yàn)證了敲減膠質(zhì)瘤U87細(xì)胞中的ATB后，細(xì)胞遷移和侵襲能力明顯受到抑制（P<0.01）。此外，Western blot實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步驗(yàn)證敲減膠質(zhì)瘤U87細(xì)胞中的ATB