含砷、汞類礦物中藥對小鼠腎臟有機陰離子轉運體及首過效應的影響.pdf

1、目的:
　　研究含砷、汞類礦物中藥對小鼠腎臟有機陰離子轉運體(Oat1，Oat3)和與首過效應相關聯(lián)的細胞色素P450(Cyp3a，Cyp2e1)、P-糖蛋白(P-glycoprotein，P-gp)的影響。
　　方法:
　　SPF級NIH小鼠，隨機分為純水組、羧甲基纖維素鈉(CMC)組、丙磺舒組(50mg·kg-1)、雄黃組(60，15 mg·kg-1)、水飛雄黃組(60，15 mg·kg-1)、朱砂組(120，30

2、 mg·kg-1)和氯化汞(HgCl2)組(0.2，0.05 mg·kg-1)，每組70只，雌雄各半。各組小鼠灌胃相應的供試物，2次/d，連續(xù)5天。第六天灌胃供試物1h后，尾靜脈注射對-氨基馬尿酸（para-aminohippuric acid，PAH，30 mg·kg-1）于1.0、2.5、5.0、7.5、10.0、20.0及30.0 min，分別從每組取10只小鼠安樂處死收集全血并迅速摘取腎臟。
　　SPF級NIH小鼠，隨機分

3、為純水組、CMC組、利福平組(40 mg·kg-1)、酮康唑組(24 mg·kg-1)、雄黃組(60，15 mg·kg-1)、水飛雄黃組(60，15 mg·kg1)、朱砂組(120，30 mg·kg-1)和HgCl2組(0.2，0.05 mg·kg-1)，每組80只，雌雄各半，灌胃方法同上。第六天灌胃供試物1h后，再灌胃對乙酰氨基酚(acetaminophen，APAP，20 mg·kg-1)于5、15、30、45、60、75、90、1

4、20 min，分別從每組取10只小鼠安樂處死收集全血并迅速摘取肝臟和小腸。
　　用藥動學軟件(DAS2.0)計算血清中PAH的藥動學參數(shù)，測定腎切片和腎勻漿中PAH的含量。以紅霉素法和氨基比林法測定小鼠肝/腸微粒體中Cyp3a活性，以苯胺法測定小鼠肝微粒體中Cyp2e1活性。測定小鼠血清和肝勻漿液中APAP濃度，用DAS2.0計算血清中APAP的藥動學參數(shù)，用超微量ATP酶測試盒測定腸勻漿液中P-gp依賴性的ATP酶的活性;用Fo

5、lin-酚法定量蛋白含量。用實時定量PCR(RT-PCR)測定小鼠腎臟Oat1、Oat3，肝臟Cyp3a11、Cyp2e1及小腸Abcb1bmRNA的表達。
　　結果:
　　測定小鼠Oats攝取活性的實驗結果:與CMC對照組比較，HgCl2高、低劑量組的t1/2β顯著延長（P＜0.01）;雄黃、水飛雄黃、朱砂、HgCl2高、低劑量組的Vd、CL和AUC0-30min均發(fā)生顯著變化:Vd縮?。≒＜0.01）、CL降低（P＜0.

6、01）、AUC0-30min增大（P＜0.05，P＜0.01）;與CMC對照組比較，雄黃、水飛雄黃、朱砂、HgCl2的高、低劑量組腎切片攝取的PAH的量顯著降低（P＜0.05，P＜0.01）;比較PAH腎臟AUC1-20min與血清AUC1-20min的比值。與CMC對照組比較，雄黃、水飛雄黃、朱砂、HgCl2的高、低劑量組AUC1-20min間的比值均顯著降低（P＜0.05，P＜0.01）。
　　測定肝臟、腸道微粒體實驗結果:無

7、論以紅霉素還是氨基比林為底物測定Cyp3a酶活性，雄黃、水飛雄黃、朱砂、HgCl2的高、低劑量組的Cyp3a酶活性均顯著高于CMC組（P＜0.05，P＜0.01）。以苯胺為底物Cyp2e1酶活性時，雄黃、水飛雄黃、朱砂、HgCl2的高、低劑量組的Cyp2e1酶活性均顯著高于CMC組（P＜0.05，P＜0.01）。
　　測定小鼠P-gp外排活性的實驗結果:與CMC對照組比較，朱砂和HgCl2高劑量組的t1/2(absorption)

8、顯著延長(P＜0.05);雄黃、水飛雄黃、朱砂、HgCl2高、低劑量組的Vd、CL和AUC5-120min均發(fā)生顯著變化:Vd縮?。≒＜0.01）、CL降低（P＜0.01）、AUC5-120min增大（P＜0.05，P＜0.01）;與CMC對照組比較，雄黃、水飛雄黃、朱砂、HgCl2的高、低劑量組肝勻漿液中APAP含量顯著升高(P＜0.05，P＜0.01);與CMC組比較，雄黃、水飛雄黃、朱砂、HgCl2的高、低劑量組P-gp偶聯(lián)的AT

9、P酶的活性被顯著抑制（P＜0.05，P＜0.01）。
　　RT-PCR測定結果:與CMC對照組比較，雄黃、水飛雄黃、朱砂、HgCl2的高劑量組腎臟Oat1、Oat3 mRNA均被顯著下調(diào)（P＜0.05，P＜0.01），肝臟Cyp3a11、Cyp2e1均被顯著上調(diào)(P＜0.01)和小腸Abcb1bmRNA均被顯著下調(diào)（P＜0.05，P＜0.01）。
　　上述各項實驗結果:CMC組與純水組之間均無統(tǒng)計學差異（P＞0.05）。