基于有機納米功能膜信號增強的生物傳感器檢測c-Myc蛋白.pdf

1、c-Myc蛋白是一種使細胞無限增值的原癌基因產物,在調節(jié)DNA合成、細胞分化、凋亡以及細胞周期的進程中起著極其重要的作用,其過度表達易使細胞轉化為惡性表型。目前,許多生物學方法如酶聯(lián)免疫吸附分析法(ELISA)和聚合酶鏈反應法(PCR)等,費時費力、成本高,因此快速檢測c-Myc含量的變化,對于癌癥的預防、診治有著非常重要的意義。本文針對如何增強生物傳感器響應信號的關鍵問題,結合電化學分析技術簡便、快速、可實時輸出的特點,利用有機納米功

2、能材料的獨特性能,制備了三種信號放大的新型電化學免疫生物傳感器,用于實際樣品中c-Myc腫瘤蛋白的檢測,優(yōu)于傳統(tǒng)生物學方法,在癌癥預防、治療等生物醫(yī)學、分子生物學領域具有十分重要的研究價值和應用前景。主要內容如下:
　　 1.采用層層自組裝方法,制備了一種基于雙抗體夾心層修飾金電極的信號增強電化學生物傳感器,即先通過組裝L-半胱氨酸、戊二醛,固定c-Myc單克隆抗體(C-Abl),形成C-Abl單抗修飾電極,可識別致癌基因c-M

3、yc蛋白;再結合上第二抗體Anti-MouseIgG(H+L)Antibody(C-Ab2),形成C-Abl/c-Myc/C-Ab2雙抗夾心修飾電極,響應信號大幅度增強,傳感性能優(yōu)于C-Abl單抗修飾電極。通過電化學阻抗和循環(huán)伏安行為探討了雙抗夾心法信號增強的機理,其阻抗值與c-myc濃度對數(shù)在0.043nM～430nM范圍內成良好的線性關系,最低檢測限也降低至25.76pM。該傳感器制備簡單,選擇性、重現(xiàn)性、穩(wěn)定性和再生性好,在鼠血清

4、樣品中測得c-Myc的回收率在97.4%～103.7%之間,表明該方法可用于實際腫瘤樣品中c-Myc的檢測,在生物醫(yī)學領域具有潛在的應用價值。
　　 2.以圓盤金電極為基底,制作了一種信號放大的新型生物傳感器,GNPs(Goldnanoparticles)標記C-Ab2/c-Myc/C-Abl修飾電極,并運用交流阻抗法和循環(huán)伏安法探討了該傳感器的性能。研究了抗癌基因c-Myc蛋白在該修飾電極上的直接電化學反應。實驗結果表明,采用

5、GNPs標記的C-Ab2,即GNPsC-Ab2修飾電極比無GNPs標記修飾電極的電化學響應大,信號更強。該傳感器(C-Abl/c-Myc/C-Ab2-GNPs)的阻抗值與c-Myc濃度對數(shù)在4.3pM～43nM范圍內成良好的線性關系,最低檢測限也降低至2.18pM。與方法1所制備的傳感器相比該傳感器具有較高的靈敏度,較好的重現(xiàn)性,良好的選擇性等優(yōu)點。在1%鼠血清中測得的c-Myc蛋白的回收率在96.3%～108.9%之間,表明該方法可用

6、于實際樣品中c-Myc的檢測。
　　 3.在方法1和方法2的基礎上,以金圓盤電極為基底,依次組裝1,6-己二硫醇、GNPs、L-cus、戊二醛、固定c-Myc單克隆抗體(C-Abl),形成C-Abl單抗修飾電極,識別c-Myc蛋白,結合GNPs標記C-Ab2實現(xiàn)信號的放大。該傳感器(GNPs/C-Abl/c-Myc/C-Ab2-GNPs)的阻抗值與c-Myc濃度對數(shù)在0.86pM～8.6nM范圍內成良好的線性關系,最低檢測限也降