小鼠肝臟引流淋巴結及其功能研究.pdf

1、肝臟是機體最大的實質器官，它在代謝和造血等方面發(fā)揮重要功能。隨著研究深入，肝臟作為一個“免疫器官”的概念受到越來越廣泛的認可。作為“免疫器官”，肝臟具有天然免疫優(yōu)勢和免疫耐受兩大特征:肝臟中含有豐富的天然免疫細胞，這使其能夠很好的發(fā)揮過濾血液、清除有害物質及血源性病原體的重要功能;另一方面，肝臟中活化信號不足以及大量的免疫負調信號使其成為誘導免疫耐受的場所。肝臟具有發(fā)達的淋巴系統(tǒng)，它產生大量的淋巴液，攜帶抗原的淋巴液被引流入肝臟的引流淋

2、巴結中。然而作為肝臟免疫系統(tǒng)的重要組成部分，肝臟引流淋巴結在肝臟行使免疫功能的過程中所發(fā)揮的作用尚不清楚，而且關于肝臟引流淋巴結的基礎知識也還有待闡明。
　　本項研究中，我們詳細描述了肝臟引流淋巴結的解剖學位置，并對肝臟引流淋巴結的結構、細胞組成、器官發(fā)生以及功能進行了研究，主要結果包括以下四個方面:
　　1、肝臟引流淋巴結的解剖學位置和特征
　　通過給小鼠肝內注射伊文思藍染料對肝臟的淋巴引流進行觀察，發(fā)現肝門區(qū)域有兩

3、個淋巴結可以引流肝臟的淋巴液:其中一個淋巴結依附在肝門靜脈上，命名為肝臟門側淋巴結;另外一個位于肝十二指腸韌帶中、在腹腔更深處，命名為肝臟腹側淋巴結。肝臟門側淋巴結和腹側淋巴結通過不同淋巴管引流肝臟的淋巴液，這證明它們是兩個獨立的肝臟引流淋巴結。另外，肝臟門側淋巴結和腹側淋巴結的解剖學特性不同種屬動物中保守。
　　2、肝臟引流淋巴結的基本結構和細胞組成
　　通過組織免疫熒光染色，我們對肝臟門側淋巴結和腹側淋巴結的基本結構進行

4、觀察，結果表明肝臟門側淋巴結和腹側淋巴結都具有經典的淋巴結的結構。值得注意的是，肝臟門側淋巴結和腹側淋巴結不僅表達外周淋巴結地址素分子，還表達粘膜相關地址素分子。通過流式細胞術，我們對肝臟門側淋巴結和腹側淋巴結的細胞組成進行了詳細分析。肝臟門側淋巴結和腹側淋巴結具有特殊的細胞組成:一方面，肝臟引流淋巴結的細胞組成與腸系膜淋巴結類似，而與外周淋巴結具有明顯差別，如肝臟引流淋巴結和腸系膜淋巴結中存在DX5-NK細胞、CD103+DC細胞、N

5、KT細胞，而缺少ICOS+Treg細胞、CD27-CD44h(i)γδT細胞;另一方面，肝臟門側淋巴結和腹側淋巴結的細胞組成存在明顯差異，如肝臟門側淋巴結中存在更多的CD103+DC和生發(fā)中心B細胞，而肝臟腹側淋巴結中存在更多的γδT細胞和NKT細胞。
　　3、肝臟引流淋巴結的器官發(fā)生
　　通過給處于不同妊娠期的孕鼠注射LTβR-Ig-Fc在小鼠胚胎期不同時間點阻斷淋巴結形成來觀察肝臟引流淋巴結的器官發(fā)生時相。結果表明，肝臟

6、門側淋巴結的器官發(fā)生起始時間早于胚胎期15.5天，肝臟腹側淋巴結的器官發(fā)生起始時間在胚胎期16.5天和18.5天之間;肝臟門側淋巴結的器官發(fā)生只部分依賴于LTβR的信號，而肝臟腹側淋巴結的器官發(fā)生完全依賴于LTβR的信號。值得注意的是，在Nfil3-/-小鼠中，肝臟腹側淋巴結發(fā)育異常，主要表現在數目的減少和體積的減小，這說明肝臟腹側淋巴結的器官發(fā)生受到轉錄因子NFIL3的調控;而肝臟門側淋巴結的發(fā)生發(fā)育則不受NFIL3缺陷的影響。器官發(fā)

7、生的時相、依賴的信號通路以及控制該過程的轉錄因子這些方面的不同，說明肝臟門側淋巴結和腹側淋巴結是兩個具有不同特征的淋巴結。
　　4、肝臟引流淋巴結的功能
　　肝臟門側淋巴結和腹側淋巴結具有不同的細胞組成且在器官發(fā)生方面存在諸多不同，那么它們的功能是否不同呢？鑒于清除血源性病原體和誘導針對腸道來源無害抗原的系統(tǒng)性免疫耐受是肝臟的兩大重要免疫功能，我們分別利用血源性病毒感染模型和口服耐受模型對肝臟門側淋巴結和腹側淋巴結的功能進行

8、探究。利用嗜肝感染的腺病毒感染模型、乙肝病毒感染模型以及淋巴網狀脈絡叢腦膜炎病毒急性和慢性感染模型，我們發(fā)現肝臟發(fā)生病毒感染后肝臟腹側淋巴結是抗病毒應答發(fā)生的主要場所，而肝臟門側淋巴結中的免疫應答較弱。利用經典的口服耐受模型，我們發(fā)現肝臟門側淋巴結是針對口服抗原誘導抗原特異性調節(jié)性T細胞的場所，而肝臟腹側淋巴結中雖然發(fā)生針對口服抗原的免疫識別，但并不誘導產生抗原特異性調節(jié)性T細胞。
　　結論:肝臟門側淋巴結和腹側淋巴結通過不同淋巴