地塞米松對人牙齦上皮細胞表達β-防御素的影響及其信號通路研究.pdf

1、目的:通過檢測地塞米松(Dex)對TNF-α誘導的人牙齦上皮細胞(HGECs)表達β-防御素-1，2(hBD-1、hBD-2)和炎癥因子IL-1β、IL-6的影響及核轉(zhuǎn)錄因子-κB（nuclear factor-κB，NF-κB）和絲裂原激活蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase，MAPK)等相關(guān)信號通路蛋白的活化情況，探討地塞米松對口腔上皮免疫的影響及作用機制。
　　方法:1.將臨床取材的正常

2、人牙齦組織采用酶消化培養(yǎng)法獲取原代牙齦上皮細胞。選用10ng/ml TNF-α誘導第三代牙齦上皮細胞24h。另一組選用p38MAPK抑制劑或NF-κB抑制劑分別孵育細胞2h后，再用10ng/ml TNF-α誘導細胞24h。提取細胞總RNA檢測hBD-2 mRNA的表達量。
　　2.不同濃度Dex(0.1，1，10μ M/L)分別培養(yǎng)第三代HGEC2h后再加入10ng/ml TNF-α誘導細胞24h。取貼壁細胞用于提取總RNA進行實

3、時熒光定量PCR(Real Time-PCR)檢測hBD-1 mRNA、hBD-2 mRNA、IL-1β mRNA、IL-6 mRNA的表達。取貼壁細胞用于提取細胞總蛋白行WesternBlot(WB)檢測p-p65NF-κB、p65NF-κB和p-p38MAPK、p38MAPK蛋白的活化程度以及p65NF-κB蛋白的核轉(zhuǎn)位情況。所有實驗重復三次。采用SPSS17.0軟件進行分析。計量資料以均數(shù)±標準差（(x)±s）表示，多組間比較采用

4、方差分析，兩組間比較采用獨立樣本t檢驗;以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。
　　結(jié)果:1.10ng/mlTNF-α能誘導HGECs hBD-2 mRNA表達量明顯升高。而在p38MAPK或NF-κB抑制劑存在的情況下，10ng/ml TNF-α誘導的HGECs hBD-2 mRNA相對表達量明顯降低（P＜0.05）。
　　2.Dex對TNF-α誘導的HGECs表達hBD-1 mRNA、hBD-2 mRNA、IL-1βmRNA

5、、IL-6 mRNA的影響。各組間HGECs hBD-1 mRNA相對表達量進行比較，差異均無統(tǒng)計學意義（均P＞0.05）。TNF-α能誘導HGECshBD-2 mRNA、IL-1β mRNA、IL-6 mRNA表達量升高(P＜0.05);在1、10μ M/L Dex存在下，TNF-α誘導的HGECs hBD-2 mRNA相對表達量下降（P＜0.05）;0.1、10μ M/L Dex也能使TNF-α能誘導的IL-1βmRNA相對表達量下

6、降(P＜0.05);0.1、1、10μ M/L Dex均能使TNF-α能誘導的IL-6 mRNA相對表達量明顯下降(P＜0.05)。
　　3.不同濃度Dex對TNF-α誘導的HGECs hBD-2 mRNA表達的通路蛋白活化情況。10ng/mlTNF-α能使HGECs p65NF-κB、p38MAPK通路蛋白明顯激活，p-p65NF-κB、p-p38MAPK蛋白的相對表達量明顯升高(P＜0.05)。在1、10μ M/L Dex的存

7、在下，TNF-α誘導的HGECs p-p65NF-κB蛋白相對表達量降低(P＜0.05)。而0.1、1、10μ M/L Dex均能使TNF-α能誘導的HGEC p-p38MAPK相對表達量明顯下降(P＜0.05)，且隨著Dex濃度的逐漸升高p-p38MAPK蛋白相對表達量也逐漸下降。
　　4.TNF-α能誘導p65NF-κB蛋白在HGECs核內(nèi)表達明顯升高，0.1、1、10μ M/L Dex均能使TNF-α誘導的p65NF-κB在