IL-22對小鼠重癥急性胰腺炎腎損傷保護作用的研究.pdf

1、目的
　　本實驗通過向小鼠腹腔注射高濃度左旋精氨酸建立重癥急性胰腺炎動物模型，并用外源性白細胞介素-22(interleukin-22，IL-22)干預模型小鼠，觀察模型小鼠胰腺及腎臟的損傷情況。探索重癥急性胰腺炎相關腎損傷發(fā)病機制，同時研究外源性IL-22對左旋精氨酸誘導的重癥急性胰腺炎相關腎損傷的保護作用及其相關的作用機制。
　　方法
　　選取48只健康雄性SPF級的BALB/c小鼠，隨機分為4組（每組12只）:正

2、常對照組(NS組)，重癥急性胰腺炎模型組（SAP組），IL-22治療組（IL-22組），PBS治療對照組（PBS組）。SAP模型小鼠的造模方法為分2次腹腔內注射20％左旋精氨酸(4g/kg體質量，間隔1h);NS組在同樣的時間節(jié)點腹腔內注入等量無菌生理鹽水。IL-22組在造重癥急性胰腺炎模型的同時分5次皮下注射重組小鼠IL-22(200ng/次，間隔24h)，PBS組在相同時間點皮下注射等量的PBS溶液。觀察并記下各組小鼠活動狀態(tài)及存活

3、狀況。注射左旋精氨酸或生理鹽水72h后，統(tǒng)計每組小鼠死亡率后采集小鼠全血，剖取胰腺和腎臟組織。光鏡下觀察胰腺和腎臟組織HE染色后的切片的病理學改變并分別給胰腺和腎的病理損傷程度評分;用全自動生化儀檢測血清中淀粉酶(amylase，AMY)、肌酐(creatinine，Cr)、尿素氮(bloodureanitrogen，BUN)的水平。WesternBlotting方法檢測腎組織中總的信號轉導與轉錄激活因子3(signaltransduc

4、erandactivatoroftranscription-3，STAT3)及磷酸化的STAT3(p-STAT3)蛋白的表達量;RT-PCR法檢測腎組織中IL-22RA1、Bcl-2和Bcl-XL的mRNA相對表達量。采用SPSS19.0進行統(tǒng)計學分析，計量資料分析采用t檢驗，統(tǒng)計量用均數±標準差（(x)±s）表示，死亡率分析采用fisher確切概率法，檢驗標準取α=0.05，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。
　　結果
　　

5、光學顯微鏡下觀察NS組小鼠HE染色的病理切片:胰腺組織無壞死及水腫，胰腺細胞排列規(guī)律;腎組織無明顯病理損傷改變。與NS組相比較，左旋精氨酸誘導的SAP組和PBS組小鼠，胰腺細胞壞死，組織腫脹，大量炎性細胞浸潤，腎臟皮質區(qū)部分腎小管管腔擴張，間隙增寬，血清AMY、Cr、BUN水平較其明顯升高，統(tǒng)計學均有意義（P＜0.05）。相較于PBS組，IL-22組小鼠胰腺組織損傷明顯減輕，腎組織切片無明顯病理損傷，且血清中AMY、Cr、BUN水平有不

6、同程度減低(P＜0.05)，兩組小鼠腎組織中STAT3蛋白總表達量無明顯差異，但IL-22組腎臟中p-STAT3蛋白表達量增高，且RT-PCR檢測IL-22RA1、Bcl-2及Bcl-XL的mRNA表達均有升高（P＜0.05)。IL-22組小鼠病死率為8.3％，PBS組小鼠病死率為41.7％，P=0.77，差異無統(tǒng)計學意義。
　　結論
　　腹腔注射高濃度左旋精氨酸可以建立小鼠重癥急性胰腺炎相關性腎損傷模型。外源性IL-22對