弓形蟲exosomes的生物學特性及其調節(jié)宿主免疫功能的研究.pdf

1、研究背景:弓形蟲是一種專性細胞內寄生的原蟲，呈世界性分布，可感染包括人和牲畜在內的所有溫血動物，引起人獸共患病的弓形蟲病，嚴重威脅人類健康和畜牧業(yè)發(fā)展。目前，尚無理想的藥物用來防治弓形蟲病。因此，深入研究弓形蟲的致病機制，尋找新的防治弓形蟲病的藥物或疫苗顯得尤為重要。Exosomes是有核細胞分泌到細胞外環(huán)境的膜性小囊泡，直徑在30-100 nm之間。其中病原體分泌的exosomes具有一些特殊的生物學功能，如介導病原體與宿主的信息交流

2、、調節(jié)宿主免疫應答等。然而，弓形蟲是否產生并分泌exosomes尚不清晰。
　　研究目的:從弓形蟲RH株和ME49株的速殖子培養(yǎng)上清液中分別提取并鑒定exosomes，評價弓形蟲exosomes對巨噬細胞和BALB/c小鼠的免疫調節(jié)作用，為尋找防治弓形蟲病的藥物或疫苗提供實驗依據(jù)。
　　研究方法:利用透射電鏡和Western blotting分析鑒定從弓形蟲速殖子培養(yǎng)液中獲取的exosomes形態(tài)結構和表面標志。用PKH67

3、綠色熒光染料對弓形蟲分泌的exosomes進行染色后與RAW264.7巨噬細胞共孵育，在熒光顯微鏡下觀察exosomes與巨噬細胞融合情況，采用ELISA法檢測弓形蟲exosomes影響小鼠巨噬細胞分泌細胞因子水平。將弓形蟲exosomes經肌肉注射免疫接種BALB/c小鼠，檢測小鼠體內產生的體液免疫與細胞免疫應答來評價其作為抗弓形蟲候選疫苗的免疫保護效果。
　　結果:透射電鏡和WB檢測結果顯示，弓形蟲exosomes形態(tài)結構呈圓

4、形或橢圓形、直徑大小在10-150 nm之間、含有蛋白分子P30和Hsp70。體外實驗結果顯示，弓形蟲exosomes能與巨噬細胞融合，且能調節(jié)巨噬細胞分泌細胞因子的水平。弓形蟲exosomes免疫接種BALB/c小鼠后能產生更高水平的IFN-γ、IL-12、IgG和IgG2a，小鼠的生存時間也明顯延長。體內實驗結果顯示，弓形蟲exosomes誘導小鼠產生一定的體液免疫與細胞免疫，可為抵抗弓形蟲速殖子攻擊提供部分免疫保護力。