MicroRNA--9-eIF5A2通路在非小細胞肺癌侵襲轉(zhuǎn)移和順鉑耐藥中的作用及機制研究.pdf

1、目的：
　　本研究的目的是驗證eIF5A2基因在非小細胞肺癌侵襲轉(zhuǎn)移和順鉑耐藥中的作用及其機制，并進一步探討MicroRNA-9/eIF5A2通路在調(diào)控非小細胞肺癌的侵襲轉(zhuǎn)移和順鉑耐藥中的作用及其機制
　　方法：
　　1.選擇4種非小細胞肺癌細胞株(A549、HCC827、NCI-H358、NCI-H1299)，利用Western-blot和RT-PCR技術(shù)檢測eIF5A2的表達，選取eIF5A2高表達的NCI-H12

2、99細胞和eIF5A2低表達的A549細胞，采用RNAi干擾技術(shù)抑制肺癌細胞系中eIF5A2表達，觀察其遷移侵襲能力的變化。
　　2.采用TGF-β1誘導A549細胞發(fā)生EMT，采用RNAi干擾技術(shù)抑制肺癌細胞系中eIF5A2表達，檢測肺癌細胞中EMT相關(guān)蛋白表達水平、遷移侵襲能力的變化。
　　3.采用GC7（eIF5A2抑制劑）抑制A549、NCI-H1299肺癌細胞eIF5A2的表達，細胞活力檢測試劑盒(CCK-8)檢測

3、肺癌細胞對順鉑化療敏感性的變化，采用RNAi干擾技術(shù)抑制肺癌細胞系中eIF5A2表達，Western-blot和免疫熒光技術(shù)檢測EMT標志物表達的變化。
　　4.檢測A549、NCI-H1299肺癌細胞miR-9的表達，采用miR-9mimic和miR-9inhibitor分別上調(diào)/下調(diào)肺癌細胞中miR-9的表達，劃痕實驗和Transwell侵襲實驗檢測肺癌細胞遷移侵襲能力的變化，RT-PCR檢測eIF5A2表達水平的變化，Wes

4、tern Blot檢測EMT標志物表達水平的變化。
　　5.采用miR-9mimic和miR-9inhibitor分別上調(diào)/下調(diào)A549、NCI-H1299、NCI-H358肺癌細胞中miR-9的表達，CCK-8檢測試劑盒、EDU法、流式細胞技術(shù)分別檢測肺癌細胞經(jīng)順鉑化療后細胞活力、增殖能力和凋亡水平的變化。
　　結(jié)果：
　　1.A549肺癌細胞eIF5A2低表達、NCI-H1299肺癌細胞eIF5A2高表達，eIF5

5、A2siRNA質(zhì)粒轉(zhuǎn)染能顯著下調(diào)eIF5A2的表達，而eIF5A2的表達水平和肺癌細胞的遷移侵襲能力呈正相關(guān)。
　　2.通過下調(diào)A549肺癌細胞eIF5A2表達，能抑制TGF-β1誘導的A549細胞的EMT過程，從而降低肺癌細胞的遷移侵襲能力。
　　3.A549、NCI-H1299肺癌細胞eIF5A2的表達水平與順鉑的化療敏感性呈負相關(guān)，而eIF5A2通過調(diào)控EMT過程從而調(diào)控肺癌細胞對順鉑的耐藥性。
　　4.A549

6、、NCI-H1299肺癌細胞中miR-9的高表達能下調(diào)eIF5A2的表達，并通過逆轉(zhuǎn)EMT過程降低肺癌細胞的遷移侵襲能力。
　　5.A549、NCI-H1299、NCI-H358肺癌細胞中miR-9的表達與順鉑的化療敏感性呈正相關(guān)，miR-9的高表達通過下調(diào)eIF5A2的表達，并逆轉(zhuǎn)EMT過程提高肺癌細胞對順鉑化療的敏感性。
　　結(jié)論：
　　本研究結(jié)果表明，在非小細胞肺癌細胞系中eIF5A2表達水平與侵襲轉(zhuǎn)移能力呈正相