血清和糖皮質激素調節(jié)蛋白激酶1在早期自然流產中的機制研究.pdf

1、第一部分 SGK1在早期流產子宮蛻膜組織中的表達改變
　　目的:
　　通過測定妊娠早期蛻膜組織中血清和糖皮質激素調節(jié)蛋白激酶1(SGK1)的表達，比較早期自然流產和正常妊娠蛻膜組織中SGK1表達的差異，探討SGK1在妊娠早期母胎界面微環(huán)境中的生物學意義。
　　材料及方法:
　　1.選擇妊娠早期不明原因自然流產者88例作為實驗研究組，同期71例的正常早期妊娠者作為對照組。
　　2.免疫組織化學法及免疫熒光技術

2、檢測子宮蛻膜組織中SGK1的表達。
　　3.TRIZOL法抽提子宮蛻膜組織的總RNA，逆轉錄后Real time PCR測定兩組子宮蛻膜組織中SGK1 mRNA相對表達量。
　　4.用含蛋白酶抑制劑的RIPA蛋白質裂解液提取人子宮蛻膜組織蛋白質，采用BCA法進行組織蛋白定量，Western blot技術進行檢測人子宮蛻膜組織中SGK1蛋白質相對表達量。
　　結果:
　　1.早期自然流產組和正常妊娠組在年齡、妊娠周

3、數(shù)、初潮年齡、月經周期、行經天數(shù)等方面無顯著差異。早期自然流產患者血清雌二醇(E2)的水平低于正常妊娠者，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.001）。
　　2.免疫組織化學法及免疫熒光發(fā)現(xiàn)SGK1在早期自然流產患者和正常妊娠者的子宮蛻膜組織中均有表達。
　　3.早期自然流產患者蛻膜組織中的SGK1的mRNA水平較早期正常妊娠者蛻膜組織中的表達下降，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.001）。
　　4.早期自然流產患者子宮蛻膜組織中SG

4、K1總的蛋白質表達低于正常妊娠者，差異具有統(tǒng)計學意義（P＜0.001）。并且，早期自然流產患者子宮蛻膜組織中SGK1磷酸化的蛋白表達低于正常妊娠者，差異具有統(tǒng)計學意義（P＜0.001），這與SGK1總蛋白在兩組之間的表達趨勢相一致。
　　5.早期自然流產患者子宮蛻膜組織中SGK1的磷酸化蛋白與總蛋白的比值低于正常妊娠組，差異具有統(tǒng)計學意義(P＜0.001)。
　　結論:
　　1.SGK1在早期妊娠子宮蛻膜組織中表達。<

5、br>　　2.早期自然流產患者蛻膜組織中的SGK1的mRNA水平、總蛋白以及活化的蛋白表達均下降。
　　第二部分 SGK1的下調與早期自然流產發(fā)生相關機理研究
　　目的:
　　通過建立體外子宮蛻膜細胞，以蛻膜細胞中SGK1蛋白活性的變化為著眼點，進一步探究早期自然流產的發(fā)生機理，為病理妊娠發(fā)病機制及防治的研究提供新的思路和途徑。
　　材料及方法:
　　1.培養(yǎng)體外子宮蛻膜細胞，用免疫熒光法鑒定其純度。

6、>　　2.MTT比色試驗檢測蛻膜細胞增殖活性，AnnexinⅤ-FITC/PI檢測蛻膜細胞凋亡。
　　3.靶向性SGK1 siRNA干擾研究SGK1對蛻膜細胞凋亡的影響。
　　4.脂多糖處理蛻膜細胞建立自然流產的體外細胞模型。
　　5.酶聯(lián)免疫吸附測定蛻膜細胞上清中的細胞因子的含量。
　　結果:
　　1.靶向性SGK1 siRNA轉染24小時后的子宮蛻膜細胞的凋亡高于對照組蛻膜細胞，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0

7、.01)。
　　2.經雌二醇刺激蛻膜細胞中SGK1的表達高于對照組，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.01)。
　　3.SGK1經雌二醇活化后使脂多糖所引起的蛻膜細胞下降的增殖活性有一定程度的恢復。SGK1的活化使脂多糖所引起的蛻膜細胞凋亡的升高有一定程度的恢復，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.01);并且使脂多糖所引起的蛻膜細胞抗凋亡基因BCL-2和XIAP的降低有一定程度的恢復，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.01）
　　4.SGK1

8、經雌二醇的刺激后活化增加IL-4和IL-5細胞因子的分泌，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.001和P＜0.01）;SGK1活化后下調IFN-γ細胞因子的分泌，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.001）;SGK1的活化上調細胞因子IL-4/IFN-γ的比值，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.01)。
　　5.SGK1經雌二醇活化后可以使脂多糖處理所導致的增加的磷酸化的NF-κ B蛋白下降以及活化的NF-κB蛋白下調(P＜0.01)。
　　結論: