脂聯素對內皮祖細胞增殖、遷移和成管的影響.pdf

1、目的：脂聯素（adiponectin，APN）對缺血性心腦血管疾病具有保護作用。脂聯素通過保護內皮細胞功能、促進血管新生、減輕炎癥反應等促進腦缺血后神經功能恢復。內皮祖細胞（endothelial progenitor cells，EPC）具有干細胞增殖分化的能力，可以參與內皮細胞成管，促進血管新生和缺血后的血管新生。目前尚未有利用內皮祖細胞聯合脂聯素轉基因治療腦缺血的研究，我們設想將脂聯素與內皮祖細胞聯合治療，觀察對腦缺血神經功能恢復

2、的影響。本實驗旨在研究脂聯素對內皮祖細胞增殖、遷移、成管等血管新生相關功能的影響。
　　方法：⑴采用臍帶血分離單核細胞方式分離培養(yǎng)內皮祖細胞，并鑒定。⑵構建攜帶脂聯素基因的慢病毒（lentivirus-GFP-APN）以及攜帶綠色熒光的對照病毒（lentivirus-GFP），使用慢病毒轉染內皮祖細胞，構建APN-EPC和GFP-EPC穩(wěn)轉株，并鑒定轉染后脂聯素的表達。⑶采用CCK8試劑盒檢測并比較APN-EPC和GFP-EPC的

3、增殖能力，采用劃痕實驗和transwell檢測并比較APN-EPC和GFP-EPC的遷移能力，檢測APN-EPC和GFP-EPC體外成管能力。
　　結果：①采用單核細胞分離方式從臍帶血中分離的內皮祖細胞經鑒定符合國際上對內皮祖細胞的定義，培養(yǎng)的內皮祖細胞具有增殖、分化等干細胞的功能，同時具有內皮細胞體外成管功能。②攜帶脂聯素基因的慢病毒轉染內皮祖細胞后可以穩(wěn)定表達脂聯素和綠色熒光蛋白，并且可以隨著增殖傳代穩(wěn)定低傳給后代。③A：CC

4、K8檢測脂聯素增殖：GFP-EPC組OD值小于APN-EPC組（GFP-EPC組OD值＝0.56±0.04，APN-EPC組OD值＝0.81±0.36，N＝5，P＝0.001）；B：劃痕實驗顯示：GFP-EPC組5h細胞遷移面積小于APN-EPC組（GFP-EPC組遷移率：15.58％±4%，APN-EPC組遷移率：23.71%±1%，N＝5，P＝0.002）；C：transwell實驗：平均每個高倍鏡視野（10X）遷移細胞GFP-EP

5、C組小于APN-EPC組（GFP-EPC組每高倍鏡視野遷移細胞數：19.33±2.24，APN-EPC組每高倍鏡視野遷移細胞數：43.07±1.224，N＝3，P＝0.001）；D：成管實驗：5h：APN-EPC組成管長度是GFP-EPC組的1.36倍，P＝0.001，24h APN-EPC組成管長度是GFP-EPC組的1.34倍,P＝0.01。
　　結論：⑴成功實現內皮祖細胞體外培養(yǎng)和傳代。⑵脂聯素可以促進內皮祖細胞的增殖、遷移