線粒體能量代謝障礙及凋亡：術后腸麻痹的一種潛在機制.pdf

1、目的：
　　本研究旨在探究腸道肌層線粒體能量代謝障礙及平滑肌細胞凋亡在術后腸麻痹(POI)發(fā)生發(fā)展的中的作用。并探究腸道肌層氧化應激與線粒體能量代謝障礙及平滑肌細胞凋亡之間的關系。
　　方法：
　　將成年雄性SPF級SD大鼠（體重230±10g，購自北京維通利華實驗動物技術公司）稱重編號隨機分為3組，每組8只:(1)空白對照(NC)組:未經任何麻醉以及手術操作。(2)假手術(SC)組:開腹后僅翻動腸袢，后關腹;(3)腸

2、道操作(IM)組:按照以往研究中廣泛采用的棉簽反復擦拭大鼠小腸的方法制作POI大鼠模型。SC組和IM組再按時間點分為術后第3、6、12和24小時組。采用棉簽擦拭大鼠小腸（約15分鐘）的方法制作大鼠POI模型。各組術后24小時采用測定經灌胃法后胃腸道各段異硫氰酸熒光素標記的右旋糖酐的分布的方法檢測胃腸道蠕動功能，并在術后對應時間點（第3、6、12、24小時）檢測腸道肌層中的氧自由基(ROS)含量，丙二醛(MDA)含量和ATP酶（鈉鉀ATP

3、酶和鈣鎂ATP酶）活性。采用實時定量熒光聚合酶鏈式反應(RT-PCR)和蛋白印跡(WB)分析檢測腸道肌層中乙醛脫氫酶2(ALDH2)、B細胞淋巴瘤2（Bcl-2）和Bcl-2相關X蛋白(Bax)的表達情況。采用高效液相色譜法(HPLC)檢測腸道肌層中ATP，ADP和AMP的含量。運用透射電子顯微鏡(TEM)觀察腸道肌層中平滑肌細胞及線粒體的超微結構改變。
　　結果：
　　與NC和SC組相比，IM組的腸道蠕動明顯延緩(P＜0.

4、01)。腸道操作導致腸道肌層ROS含量和MDA水平明顯升高（P＜0.01），且均在6h時達到最高峰（P＜0.01）。腸道操作還能導致ALDH2水平及Bcl-2/Bax比率顯著升高(P＜0.01)，并均在6h時達到最高峰(P＜0.01)。腸道操作還導致ATP和ADP水平下降（P＜0.01），并在12h時達到最低峰（P＜0.01），腸道操作還AMP水平升高（P＜0.01），并在12h時達到最高峰(P＜0.01)。鈉鉀ATP酶和鈣鎂ATP酶活

5、性在3h時顯著升高，隨后迅速下降，并在12h時達到最低峰（P＜0.01）。在NC和SC組中，通過電鏡觀察得到的電子顯微圖顯示腸道肌層正常的平滑肌細胞和線粒體形態(tài)學結構。而在IM組，我們觀察到平滑肌細胞核皺縮和染色質濃縮，線粒體腫脹破裂以及扭曲的嵴結構。
　　結論：
　　在POI動物大鼠腸道肌層中，氧化應激水平顯著提高，線粒體能量代謝發(fā)生障礙以及平滑肌細胞凋亡的發(fā)生。我們的研究為腸道肌層細胞線粒體能量代謝障礙和平滑肌細胞凋亡是