CUL4A調(diào)控NF-κB信號通路在促進(jìn)胃癌侵襲中的分子機(jī)制.pdf

1、分類號：密級：UDC：學(xué)號：416523613049南昌大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文CUL4A調(diào)控調(diào)控NFκB信號通路在促進(jìn)信號通路在促進(jìn)胃癌侵襲中的分子機(jī)制胃癌侵襲中的分子機(jī)制LPSactivatesCUL4ANFκBsignalingtopromotegastriccancercellsinvasion公宇培養(yǎng)單位（院、系）：南昌大學(xué)第一附屬醫(yī)院指導(dǎo)教師姓名、職稱：熊建萍教授、主任醫(yī)師申請學(xué)位的學(xué)科門類：臨床醫(yī)學(xué)碩士學(xué)科專業(yè)名稱：腫瘤學(xué)論

2、文答辯日期：2016年6月答辯委員會(huì)主席：評閱人：2016年6月摘要II摘要目的：目的：探討CUL4A在炎癥促進(jìn)胃癌侵襲性中影響，以及闡明CUL4A通過調(diào)控NFκB信號通路參與這一過程的分子機(jī)制。方法：方法：1、選擇HGC27胃癌細(xì)胞株，轉(zhuǎn)染CUL4AsiRNA以及轉(zhuǎn)染無義序列NC。在炎癥刺激物L(fēng)PS的刺激下，采用細(xì)胞劃痕、Transwell實(shí)驗(yàn)檢測四組胃癌細(xì)胞（NC、LPS、CUL4AsiRNA、LPSCUL4AsiRNA）的遷移及侵

3、襲能力。2、采用westernblot技術(shù)檢測LPS對CUL4A和NFκB蛋白刺激作用以及刺激的最佳時(shí)間和最適濃度。3、采用westernblot和RTPCR技術(shù)檢測CUL4AsiRNA對CUL4A蛋白及mRNA水平表達(dá)的抑制情況。在最佳時(shí)間和最適濃度LPS刺激下，采用westernblot技術(shù)檢測分別轉(zhuǎn)染CUL4AsiRNA和無義序列NC胃癌細(xì)胞的NFκB的蛋白表達(dá)情況和用RTPCR技術(shù)檢測NFκB信號通路下游炎癥因子的mRNA水平。

4、4、采用免疫組織化學(xué)（Immunohistochemistry，IHC）和westernblot技術(shù)同時(shí)檢測CUL4A和NFκB蛋白在胃癌及癌旁組織標(biāo)本中的表達(dá)的情況，并分析它們在胃癌組織中表達(dá)之間的相關(guān)性。結(jié)果：結(jié)果：1、細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)及Transwell實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，LPS能夠促進(jìn)胃癌細(xì)胞的侵襲和遷移能力，但下調(diào)CUL4A則這一促進(jìn)作用減弱。2、LPS能夠增強(qiáng)CUL4A和NFκB的蛋白表達(dá)，且最佳時(shí)間和最是濃度都分別是2h和100ng

5、mL。3、Westernblot和RTPCR結(jié)果表明，CUL4AsiRNA能夠有效的在蛋白水平及mRNA水平上抑制CUL4A的表達(dá)。與此同時(shí)，轉(zhuǎn)染了CUL4AsiRNA的胃癌細(xì)胞組與NC組相比NFκB的表達(dá)明顯下降，且下游的一些炎癥因子mRNA表達(dá)也下降。4、免疫組織化學(xué)實(shí)驗(yàn)中，CUL4A蛋白主要染色在胃癌組織的細(xì)胞膜和細(xì)胞核中，而NFκB蛋白染色主要在細(xì)胞核中。CUL4A和NFκB在胃癌組織中的表達(dá)是呈正相關(guān)的。胃癌及癌旁組織的wes