鼻咽癌中STING信號通路調控髓源性抑制細胞的分子機制及臨床意義研究.pdf

1、鼻咽癌(Nasopharyngeal carcinoma，NPC)是一種高發(fā)于我國華南地區(qū)的惡性腫瘤，95％以上的NPC與EB病毒(Epstein-Barr virus，EBV)感染密切相關。放化療為基礎的綜合治療是目前主流的治療方式，但局部進展的NPC5年復發(fā)率在40％以上，復發(fā)難治、遠處轉移的NPC中位總生存時間不足1年。腫瘤免疫治療，因其低毒性和潛在的治愈性，成為當下研究的熱點。PD-1抗體、過繼性T細胞回輸?shù)让庖咧委煟言贜PC

2、顯示出初步的療效。然而，已有的免疫治療有效率偏低:腫瘤微環(huán)境中的抑制性細胞、負向調控分子，是腫瘤免疫逃逸及免疫治療失敗的重要原因。髓源性抑制細胞(myeloid-deprived suppressor cells，MDSC)，是一種具有抑制功能的未成熟髓系細胞。MDSC在NPC大量擴增、活化，抑制了殺傷性T細胞的功能，促進了腫瘤的侵襲和轉移。
　　STING信號通路，是免疫系統(tǒng)識別細胞質中異常來源的雙鏈DNA，發(fā)揮天然免疫的重要通

3、路:皰疹病毒、結核分枝桿菌等病原體的DNA，進入樹突細胞的細胞質，該通路被激活，樹突細胞合成大量的Ⅰ型干擾素，促進抗原呈遞、啟動適應性免疫反應。近兩年的研究表明:來源于腫瘤的DNA，也可以激活STING信號通路，啟動抗腫瘤免疫反應。
　　目的:
　　研究STING信號通路在NPC的活化狀態(tài)，探索該通路與MDSC分化的關系及臨床意義。
　　方法:
　　1.檢測STING信號通路的活化狀態(tài):利用免疫組化、ELSIA(

4、the enzyme-linkedimmunosorbent assay)、Westemblot等，檢測臨床樣本（腫瘤及癌旁組織、患者及健康人血清）和細胞系（癌細胞系、正常鼻咽上皮細胞系）中STING的表達、信號通路的活性。
　　2.分析STING信號通路影響MDSC的分化:利用過表達、siRNA沉默、磷酸化位點突變等技術手段以及癌細胞和CD33+細胞共培養(yǎng)體系，流式檢測分析STING信號通路對MDSC分化的影響。收集共培養(yǎng)體系上

5、清，ELISA測定IL-6、GM-CSF、IL-1β等細胞因子。
　　3.篩查調控STING的miRNA:結合生物信息學預測，利用qPCR、Western Blot及熒光素酶報告基因實驗，篩查并驗證NPC中調控STING的miRNA。
　　4.研究STING信號通路的臨床意義:收集臨床資料，統(tǒng)計分析STING信號通路與MDSC水平、EB病毒DNA載量、分期、預后等臨床指標的相關性。
　　結果:
　　1.STING

6、信號通路在NPC中下調:癌組織中的STING表達量顯著地低于配對的癌旁組織(n=22，p＜0.001)，患者血清中的STING濃度顯著地低于健康人(p=0.025)。癌細胞系（TW03、CNE2）中STING的表達量，低于正常鼻咽上皮細胞系(NP69); HSV-1刺激后，TW03、CNE2中p-TBK1、p-IRF3水平及IFN-βmRNA轉錄水平，低于NP69。
　　2.STING信號通路的下調促進了MDSC的分化:相比于對照

7、組，過表達STING的TW03，誘導產(chǎn)生的MDSC數(shù)目明顯減少(p＜0.05)，對T細胞增殖的抑制能力明顯減弱(p＜0.05);利用siRNA技術敲低TW03中的STING或將STING磷酸化位點突變，誘導MDSC的結果正好相反。患者腫瘤組織中，STING與CD33的表達量，呈顯著的負相關(n=50，p＜0.001).
　　3.miR-24調控STING的表達:生物信息學預測，STING是miR-24的直接作用靶點;TW03、CN

8、E2細胞系中過表達miR-24，可下調STING mRNA的轉錄及STING蛋白的表達;熒光素酶報告基因實驗證實，miR-24可直接結合STING3'UTR。
　　4.腫瘤組織中STING表達的臨床意義:患者腫瘤組織中STING的表達量，與血清中STING的濃度線性相關(n=50，r=0.5928，P＜0.0001)，與基線EB病毒DNA載量負相關(n=50，P=0.041)，與接受同步放療后的無復發(fā)生存時間正相關(n=89，p=