Aβ3-10短肽疫苗早期主動免疫APP-PS1雙轉基因小鼠體內抗體形成及對腦內Aβ沉積的研究.pdf

1、目的：
　　阿爾茨海默病(Alzheimer's disease，AD)是臨床上最常見的引起癡呆的疾病，近期記憶損害為其主要的臨床表現。AD主要的病理特征是細胞外β淀粉樣斑塊（β-amyloid plaques，Aβ斑）沉積和細胞內神經元纖維纏結。傳統的Aβ瀑布學說認為Aβ斑的毒性作用位于發(fā)病機制的核心，Aβ斑的存在誘導了細胞內微管相關tau蛋白的過度磷酸化、神經元纖維纏結、突觸損害，最終導致AD的發(fā)生。
　　對Solane

2、zumab的Ⅲ期臨床試驗數據進行二次分析顯示，輕度認知障礙的患者(AD前輕度認知功能障礙)從Solanezumab的被動免疫治療中獲益，表現為認知功能障礙下降的延緩，提示預防性免疫的重要性。本實驗選用幼年APP/PS1雙轉基因小鼠，在小鼠腦內還沒有Aβ沉積的情況下，使用我們構建的新型針對Aβ3-10位點的多肽疫苗對小鼠進行預防性免疫，比較我們構建的新型疫苗與傳統的Aβ1-42肽疫苗刺激體內抗體形成的水平，并探討主動免疫對Aβ沉積的影響。

3、
　　方法：
　　人工合成連接血藍蛋白(Keyhole limpet hemocyanin，KLH)的Aβ3-10肽段作為實驗組的免疫肽段，以Aβ1-42肽作為對照組1的免疫肽段，以PBS作為對照組2。將Aβ3-10-KLH、Aβ1-42分別配成濃度為2mg/ml的溶液，將其分別與弗氏佐劑（第一次注射為弗氏完全佐劑，以后每次注射為弗氏不完全佐劑）等體積混合，配成濃度為1 mg/ml的溶液，取100ul（即100ug/100u

4、l／只）小鼠皮下注射。前兩次免疫的時間間隔為2周，以后每次免疫的時間間隔為4周。在免疫前及每次免疫后10天采血提取血清。利用PH=3.5的酸性條件使Aβ和抗體解離后，根據Aβ和抗體的分子量不同，使用超濾離心管將Aβ和抗體分離，再使用傳統的ELISA方法檢測免疫前及每次免疫后血清中總抗體濃度。使用免疫組化的方法檢測小鼠腦內Aβ斑的沉積情況。
　　結果：
　　使用我們合成的新型多肽疫苗Aβ3-10-KLH和傳統的全長Aβ1-42

5、疫苗免疫APP/PS1小鼠均可成功刺激小鼠產生抗Aβ抗體，且抗體的水平隨免疫次數的增加而逐漸增高。將KLH與Aβ3-10耦聯后，可增強Aβ3-10短肽的免疫原性，刺激小鼠在早期產生高水平的抗體，至末次免疫后，Aβ3-10-KLH刺激小鼠產生的抗體平均水平比傳統的全長Aβ1-42肽高，但兩者之間差異不具有統計學意義。小鼠腦片免疫組化染色顯示，與PBS組相比，Aβ3-10-KLH組、Aβ1-42組腦內Aβ斑的沉積量明顯減少，差異具有統計學意