中性粒細胞彈性蛋白酶對人肝內膽管上皮細胞粘蛋白MUC5AC表達的影響.pdf

1、目的：
　　肝內大膽管過度分泌粘液所導致的慢性增生性膽管炎是肝膽管結石的形成過程中的主要致病因素。組織學上，肝膽管結石病肝中的膽管壁內和膽管周圍腺體均呈明顯的增生性病理改變，其分泌的粘液排放到膽管的內表面形成了一個捕捉鈣鹽脂質的成石微環(huán)境。粘蛋白是膽管粘液和結石基質的重要成分，其中MUC5AC是膽管上皮分泌的最主要的粘蛋白，其在膽石病患者中明顯高表達。因此，闡明影響膽管上皮粘蛋白合成調控機制及其影響因素，對于肝膽管結石病的預防和治

2、療具有重要意義。
　　粘蛋白是一種廣泛分布于人體組織及粘膜表面的粘液的主要成分，在體內主要起潤滑，保護粘膜及免疫調節(jié)等作用，正常生理條件下構成人體必不可少的生理屏障。研究發(fā)現粘蛋白MUC5AC在正常肝內膽管組織中幾乎無表達。
　　中性粒細胞彈性蛋白酶(Neutrophil elastase，NE)屬于絲氨酸蛋白酶的胰凝乳蛋白酶家族，成熟的中性粒細胞中并無NE的表達，生理條件下NE與其抑制劑保持平衡構成機體防御系統(tǒng)的重要部分，

3、在受到炎癥，毒素、細菌(LPS)等有害物質侵犯時，NE的大量釋放可以降解細胞外基質，增加組織通透性，促進中性粒細胞的滲出及向炎癥部位趨化集中，釋放IL-8等炎癥因子。有研究已經表明在呼吸道上皮中，中性粒細胞彈性蛋白酶(NE)可通過ROS、細胞因子等多種途徑刺激組織粘蛋白的過度表達，其中以MUC5AC最為主要。但是目前NE在肝內膽管結石形成中的作用及其在粘蛋白MUC5AC表達中的調節(jié)作用尚不明確。
　　本課題擬檢測MUC5AC在肝內

4、膽管結石病肝組織中的表達及NE對人肝內膽管上皮細胞粘蛋白MUC5AC表達達影響。
　　方法：
　　1、肝內膽管結石患者肝臟組織中粘蛋白MUC5AC的表達
　　收集我院2008年01月至2013年12月肝內膽管結石患者及正常肝臟（肝破裂患者）肝臟組織病理標本，應用免疫組化方法測定兩組患者肝臟組織中粘蛋白MUC5AC的表達。
　　2、.NE誘導人肝內膽管上皮細胞MUC5AC表達的改變
　　以NE(50ng/ml

5、)刺激人肝內膽管上皮細胞，12h后Realtime-PCR方法檢測MUC5AC mRNA水平，24h后Western blot檢測MUC5AC蛋白水平。
　　結果：
　　1、肝內膽管結石患者肝臟組織中的粘蛋白MUC5AC表達顯著高于正常肝臟組織。
　　2、中性粒細胞彈性蛋白酶(NE)可誘導人肝內膽管上皮細胞MUC5AC高表達。
　　以NE(50ng/ml)刺激人肝內膽管上皮細胞，12h時MUC5AC mRNA表達