細胞色素b5還原酶2對鼻咽癌細胞抑制作用的機制研究.pdf

1、細胞色素b5還原酶2(cytochrome b5 reductase2，CYB5R2)含有一個鐵氧還蛋白還原酶類黃素腺嘌呤二核苷酸結合結構域，屬于黃素蛋白的吡啶核苷酸還原酶家族。其參與多種生理反應，如電子運輸、氧化還原、脂質代謝、脂肪酸的去飽和延伸以及紅細胞中高鐵血紅蛋白的還原反應等。我們的前期研究發(fā)現，CYB5R2基因在鼻咽癌中因啟動子區(qū)CpG島DNA高甲基化而轉錄失活，外源性表達CYB5R2可抑制鼻咽癌細胞增殖、遷移、克隆形成及其在

2、裸鼠體內成瘤的能力，但是其抑癌機制尚未明確。
　　為了進一步探索CYB5R2基因在鼻咽癌發(fā)生發(fā)展中的作用及其抑癌作用的分子機制，我們通過Human Cancer PathwayFinder PCR Array技術分析外源性表達CYB5R2基因對HONE1細胞中腫瘤相關的6個主要通路中的84個關鍵基因轉錄水平的影響，尋找CYB5R2基因抑癌的關鍵通路。結果顯示:外源性表達CYB5R2基因后HONE1細胞中共有10個基因顯著差異表達，

3、其中FAS,CDKN2A，ITGB3，MTSS1和IFNB1基因表達增高，而ITGB5，VEGF, IGF1，TEK和TGFBR1基因表達下調。促凋亡基因FAS的mRNA表達水平上調1.81倍;參與細胞周期控制和DNA損傷修復相關基因CDKN2A的mRNA表達水平上調1.57倍;黏附相關基因如ITGB3，MTSS1的mRNA表達水平上調，分別是1.68倍和1.59倍，ITGB5的mRNA水平下調8.72倍;抗血管生成基因IFNB1的mR

4、NA表達水平上調1.84倍;促血管生成基因如VEGF, IGF1，TEK和TGFBR1的mRNA表達水平下調，分別是1.69倍、1.57倍、10.28倍和1.71倍。我們對10個基因的差異表達用實時熒光定量RT-PCR進行驗證，結果與Human Cancer PathwayFinder PCR Array結果趨勢一致。
　　我們通過流式細胞凋亡實驗、Caspase活性檢測實驗、細胞周期實驗、侵襲小室實驗、雞胚絨毛尿囊膜移植瘤模型實

5、驗進一步分析了CYB5R2基因參與調控的下游通路的腫瘤分子生物學機制。結果表明，轉染CYB5R2基因的鼻咽癌細胞比轉染空載體的鼻咽癌細胞株發(fā)生凋亡的細胞數目明顯增多，并且細胞中Caspase8和Caspase9的活性水平增高。轉染CYB5R2基因的鼻咽癌細胞比轉染空載體的鼻咽癌細胞發(fā)生周期阻滯的細胞數目明顯增多。侵襲小室實驗表明轉染CYB5R2基因的鼻咽癌細胞中發(fā)生侵襲轉移的細胞數目比轉染空載體的鼻咽癌細胞明顯減少。通過雞胚絨毛尿囊膜移

6、植瘤模型實驗，我們發(fā)現轉染CYB5R2基因的鼻咽癌細胞比轉染空載體的鼻咽癌細胞形成的移植瘤體積明顯減小、移植瘤周圍新生血管所占尿囊膜面積比例明顯下降。分析雞胚移植瘤的組織切片HE染色及免疫組化染色，發(fā)現轉染CYB5R2基因的鼻咽癌雞胚移植瘤內新生血管明顯減少，VEGF的陽性染色明顯減少，說明CYB R2基因能夠抑制鼻咽癌血管生成。
　　綜上所述，CYB5R2可以在細胞凋亡、細胞周期調控、侵襲轉移能力和血管形成能力等多方面抑制鼻咽癌