X染色體失活研究與女性缺血性卒中誘導多能性干細胞系的建立.pdf

1、【研究背景】：
　　卒中嚴重降低了人類的生活質量，并給社會帶來了惡劣的影響，缺血性腦卒中為最常見的病發(fā)類型。相比之下，女性的生命周期較長，因此女性的腦卒中發(fā)病比例要高于男性，專家預測，截止到2050年，腦卒中的發(fā)病率女性將比男性高出三十個百分點。同時，女性獨特的生理因素，導致中老年的女性發(fā)生卒中后，社會活動能力更差，個人生活更加困難。
　　隨著2003年人類基因組測序工作的完成，世界各國科學家逐漸把注意力投入到遺傳學的研究，

2、而缺血性卒中與表觀遺傳學之間一直為熱點研究。其中，X染色體失活是表觀遺傳學的重要組成部分，并已經證實與多種人類疾病相關聯(lián)。X染色體失活包括傾斜性失活和隨機性失活，本課題將對比缺血性卒中患者與正常人群的X染色體失活情況，探索X染色體失活與女性缺血性卒中是否存在關聯(lián)，如果存在關聯(lián)，哪種失活與缺血性卒中的關聯(lián)性有意義，從而達到對女性缺血性卒中的危險因素的研究及預防目的。
　　在研究X染色體失活與缺血性卒中的同時，選取一例伴有家族史卒中史

3、且已證實X染色體隨機性失活的缺血性卒中女性患者的血液，從外周淋巴細胞誘導為多能干細胞，并研究細胞誘導前后的X染色體失活情況。
　　【目的】：
　　1.X染色體傾斜性失活與女性缺血性腦卒中的相關性研究。
　　2.建立女性缺血性卒中的誘導多能性干細胞系,為闡述缺血性卒中的發(fā)病機制、臨床治療及藥物篩選做鋪墊。
　　3.誘導前后的X染色體失活狀態(tài)研究。
　　【方法】：
　　1.收集女性缺血性腦卒中新發(fā)病例組及

4、健康對照組外周血標本各60例，從血液標本中進行DNA提取，運用基因片段方法對其進行雜純合子分析。在雜合子人群中，分別對實驗組和對照組的樣本行甲基化處理，隨后對其MS-PCR，最后，運用ABI3100基因分析儀判斷失活類型。
　　2.使用含四因子的仙臺病毒轉染人外周血淋巴細胞,建立誘導性多能干細胞(human peripheral blood mononuclear cells induced pluripotent stem ce

5、lls， hPBMC-iPSCs),并且從基因表達、體內分化能力和分化核型等不同方面進行檢測。對hPBMC-iPSCs提取DNA，并運用方法1，對其失活狀態(tài)進行檢測。
　　【結果】：
　　1.女性缺血性卒中組和健康人群組對比發(fā)現(xiàn)，兩者基因的純合子發(fā)生率近似，而X染色體傾斜性失活卒中組明顯升高。
　　2.建立了1株女性缺血性卒中的hPBMC-iPSCs，所建立的hPBMC-iPSCs在體外能維持自我更新和多能性的狀態(tài),可

6、表達多能標志基因,在體外長期培養(yǎng)能維持正常核型，在體內、體外均可向三個胚層分化。
　　3.誘導后的多潛能干細胞由誘導前的X染色體隨機失活變?yōu)閮A斜性失活。
　　【結論】：
　　1.女性缺血性卒中發(fā)病率與X染色體傾斜性失活有明顯關聯(lián)性，為預測女性卒中的發(fā)生提供了相關證據。
　　2.以四因子作為誘導基因，通過仙臺病毒轉錄技術，成功將人外周血中淋巴細胞在體外誘導成iPS細胞。
　　3.對iPS的生物學鑒定顯示，iP