Kiss-1對裸鼠鼻咽癌移植瘤轉移的抑制作用.pdf

1、目的：（1）探討 Kiss-1基因在鼻咽癌轉移中的抑制作用（2）評價通過轉染技術把Kiss-1基因轉入體內在鼻咽癌的防治中的應用價值。
　　方法：（1）構建了含Kiss-1重組慢病毒質粒并轉染該基因低表達的鼻咽癌細胞株（SUNE-1-5-8F），并將其經過嘌呤霉素的篩選，從而獲得了Kiss-1基因高表達的穩(wěn)轉細胞，并對其進行培養(yǎng)、傳代、凍存及復蘇。（2）用Western blot來檢測轉染前后 Kiss-1蛋白的表達水平及熒光定量

2、反轉錄-聚合酶鏈反應來檢測轉染前后Kiss-1mRNA的表達水平。（3）將轉染 Kiss-1的鼻咽癌細胞（SUNE-1-5-8F）及未轉染的鼻咽癌細胞（SUNE-1-5-8F）分別接種至40只裸鼠腋下，分為2組，每組20只，每周觀察2-3次腫瘤生長的情況，裸鼠養(yǎng)至2個月左右時將其處死，解剖出腫瘤及肝、肺等臟器，并對裸鼠腋下移植瘤行免疫組化檢查，在組織水平上驗證Kiss-1是否轉入鼻咽癌細胞（SUNE-1-5-8F）中，并對裸鼠肝肺行病理

3、檢查，比較兩組裸鼠肺肝等轉移瘤的多少，差別是否有意義。
　　結果：（1）我們將Kiss-1基因成功轉入鼻咽癌細胞株（SUNE-1-5-8F），完成了轉染后細胞的培養(yǎng)、傳代、凍存、復蘇等。（2）轉基因組 Kiss-1蛋白及 mRNA的表達較空質粒轉染組和對照組顯著增加(P<0.05)，另轉染組與未轉染組裸鼠腋下移植瘤行免疫組化檢查，結果示轉染組 Kiss-1基因的含量高，從而從基因、蛋白及組織水平上驗證了Kiss-1成功轉染到鼻咽癌