Ankrd17在細胞周期調控中的功能研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、細胞周期調控主要是通過蛋白質激酶介導的信號轉導完成的,而Cyclin-CDK蛋白激酶復合體又為其中最為關鍵的調控分子.不同的Cyclm-CDK復合體在細胞周期的不同時相發(fā)揮不同的作用.CyclinE/CDK2復合體在細胞周期的G1/S轉換過程中扮演著非常重要的角色.目前已經發(fā)現(xiàn)一些分子與Cyelin/CDK2激酶復合體相互作用而調節(jié)細胞周期的過程.但是Cyclin/CDK2調控細胞周期詳盡的作用機制尚未明晰. 本研究利用TAP(

2、Tandem Affinity Pufification,TAP)親合純化技術篩選了與CDK2相互作用的蛋白-Ankrd17,且已證明該蛋白為CyclinE/CDK2的底物.本文旨在研究Aukrd17蛋白在細胞周期中的功能.首先,通過RT-PCR的方法檢測Ankrd17在人正常組織、正常細胞株及腫瘤細胞株中基因的表達水平,發(fā)現(xiàn)Ankrd17基因在人不同正常組織、正常及腫瘤細胞中均有表達,且在細胞周期不同時段表達水平基本恒定.其次,構建了

3、人源Ankrd17基因的真核表達載體,并在哺乳細胞HCT116中進行過量表達.采用表達EGFP的質粒和目的基因Ankrd17共轉染HCT116細胞的方法,篩選陽性細胞分析當Ankrd17與CyclinE/CDk2相互作用時其在細胞周期G1/S轉換中的作用.實驗結果表明,在HCT116細胞中過量表達Ankrd17蛋白對細胞周期有明顯的促進作用.再次,構建了的CyclinA1的原核表達載體,并進行了GST-CyclinA1融合蛋白的表達純化

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