嗜酸乳桿菌細胞壁肽聚糖的分離提取及其免疫活性的研究.pdf

1、嗜酸乳桿菌(Lactobacillus acidophilus)是乳酸菌家族中的重要一員，它能在腸道中定植，當達到一定數量時，能改善或調節(jié)腸道微生物菌群的平衡、增強機體免疫力及抑制腫瘤細胞的形成等。肽聚糖(Peptidoglycan，PG)是細菌等原核生物細胞壁的特有組成成分。真核細胞中不含肽聚糖，因此肽聚糖成了真核生物免疫系統(tǒng)識別的理想靶位。研究表明，高等真核生物體中含有若干肽聚糖識別分子，這些活性分子通過不同的信號傳導途徑誘導釋放免

2、疫調控物質，從而刺激免疫系統(tǒng)發(fā)揮免疫功能。目前，雙歧桿菌細胞壁肽聚糖已被成功分離提取出來，并被證明是一種新型的非特異性免疫增強劑。而嗜酸乳桿菌細胞壁肽聚糖的相關研究還鮮見報道。因此，在對嗜酸乳桿菌細胞壁肽聚糖進行分離提取研究的同時，結合生理活性試驗證明其免疫活性，對深層次開發(fā)嗜酸乳桿菌微生態(tài)制劑及益生菌免疫佐劑具有重要意義。 本文在篩選生長期短、產量大的嗜酸乳桿菌菌株，優(yōu)化增菌培養(yǎng)基的基礎上，分別采用超聲波法、溶菌酶法及三氯乙

3、酸法分離提取嗜酸乳桿菌細胞壁肽聚糖，并通過生理活性試驗證明得到的嗜酸乳桿菌細胞壁肽聚糖具有抗腫瘤及免疫調節(jié)功能，為嗜酸乳桿菌微生態(tài)制劑及益生菌免疫佐劑的研究和開發(fā)奠定了良好的基礎。實驗內容及結果如下： 1．開展了菌株篩選及培養(yǎng)基優(yōu)化的研究。通過對多株嗜酸乳桿菌菌株進行篩選，得到了1株生長期較短、產量較大的嗜酸乳桿菌菌株La2；在此基礎上進行了增菌培養(yǎng)基的優(yōu)化。使用優(yōu)化得到的增菌培養(yǎng)基測定La2的生長曲線，確定了增菌培養(yǎng)基培養(yǎng)終

4、止時間為12h，此時OD<,600>值為2.167，pH值為4.01；通過平板菌落計數，活菌數為3.8x10<'9>cfu/mL，是普通MRS培養(yǎng)基的5.4倍。 2．采用超聲波法、溶菌酶法、三氯乙酸法分離提取La2細胞壁肽聚糖。其中超聲波法的最優(yōu)組合為：超聲功率400W、超聲時間30min、超聲溫度40℃，肽聚糖得率為10.2％；溶菌酶法的最優(yōu)組合為：溶菌酶添加量4mg/mL，水浴溫度55℃，作用時間5h，pH值7，肽聚糖得率

5、為10.0％；三氯乙酸法肽聚糖得率為15.8％。通過多重比較，確定使用三氯乙酸法提取嗜酸乳桿菌La2細胞壁肽聚糖。 3．對得到的肽聚糖提取物的氨基酸組成進行了分析，其主要氨基酸組成天冬氨酸、谷氨酸、丙氨酸、賴氨酸均為嗜酸乳桿菌肽聚糖上與N-乙酰胞壁酸羧基連接的肽鏈上的氨基酸分子；同時測得肽聚糖提取物的氨基己糖濃度為2.831mmol/g，磷含量為0.0319mg/g，分子量主要分布在30kD左右。 4．證明了La2細