OSTP-DDP靶向抑制卵巢癌A2780細胞生長的研究.pdf

1、目的：在前期實驗研究中，本課題組的研究人員利用體內(nèi)噬菌體展示技術首次篩選得到了卵巢癌特異性結合肽（ovarian cancer specific targeting peptide，OSTP），并對其性質(zhì)進行了驗證。本實驗進一步將OSTP與順鉑（cis-Dichlorodiamineplatinum，DDP）進行耦聯(lián)，研究該耦聯(lián)物（OSTP-DDP）對卵巢癌A2780細胞的靶向抑制作用。為探索和研究新的腫瘤分子靶向藥物奠定基礎。

2、　　方法：OSTP-DDP化學合成；體外培養(yǎng)卵巢癌A2780細胞；CCK-8法（Cell Counting Kit-8）檢測OSTP-DDP對卵巢癌A2780細胞的生長抑制作用，并計算其IC50值；平板克隆形成實驗檢測OSTP-DDP對卵巢癌A2780細胞的生長抑制作用；流式細胞術檢測OSTP-DDP對卵巢癌A2780細胞的周期和凋亡的影響；高效液相色譜分析(HPLC)檢測OSTP-DDP進入卵巢癌A2780細胞的量；建立卵巢癌A278

3、0細胞的裸鼠移植瘤模型，隨機分成4組（空白組、DMSO組、DDP組和OSTP-DDP組），驗證OSTP-DDP的體內(nèi)靶向抑瘤作用；檢測裸鼠血常規(guī)和生化常規(guī)，觀察OSTP-DDP的全身毒副作用。
　　結果：
　　1、從質(zhì)譜分析(MS)和高效液相色譜(HPLC)分析中得出，OSTP-DDP合成成功。
　　2、體外CCK-8法表明分別用不同濃度的OSTP-DDP與DDP（10、20、40、80、160、320μmolL-1）

4、處理A2780細胞24h、48h、72h后均可抑制A2780細胞的生長，并且該抑制作用隨著時間和濃度逐漸增強。OSTP-DDP的作用強于DDP（P<0.05），提示OSTP-DDP具有對卵巢癌A2780細胞生長的靶向抑制作用。
　　3、通過平板克隆形成實驗結果顯示OSTP-DDP和DDP均可抑制腫瘤生長，但兩者的差異無明顯的統(tǒng)計學意義(p＞0.05)。
　　4、通過流式細胞術檢測表明：經(jīng)OSTP-DDP和DDP作用后，A27

5、80細胞的生長周期均被阻滯于G1期，作用72h后，OSTP-DDP組細胞周期被阻滯在G1期為77.41±1.36，DDP組細胞周期被阻滯在G1期為71.11±0.86，說明OSTP-DDP對卵巢癌A2780細胞的周期阻滯作用強于DDP，差異具有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。作用24h、48h、72h后，OSTP-DDP組的凋亡率分別為：7.51％、44.46%、52.73%，DDP組的凋亡率分別為：4.44%、13.66%、15.67%。

6、OSTP-DDP對卵巢癌A2780細胞凋亡的作用強于DDP組（P<0.01），差異具有統(tǒng)計學意義，提示OSTP-DDP具有較強的誘導細胞凋亡的靶向作用。
　　5、通過高效液相色譜分析，結果顯示：OSTP-DDP液體樣品中殘留的DDP含量分別為12.7696%（20μmolL-1）、0.8162％（40μmolL-1）、0.5406％（80μmolL-1）、0.0800％(160μmolL-1)、0.0700％（320μmolL-1

7、）。DDP液體樣品中殘留的DDP含量分別為17.1123%（20μmolL-1）、1.2643％（40μmolL-1）1.1500％（80μmolL-1）、1.1191％(160μmolL-1)、0.1091％（320μmolL-1）。顯示OSTP-DDP組中DDP進入細胞的量要多于DDP組進入細胞的量。
　　6、卵巢癌裸鼠移植瘤模型構建成功，體內(nèi)實驗表明3mg2kg-1OSTP-DDP與DDP均對卵巢癌A2780細胞移植瘤具有一