從生化水平探討MC-RR及藍藻水華粗提物經口染毒對小鼠肝臟的毒性效應.pdf

1、浙江大學醫(yī)學院博士學位論文從生化水平探討MCRR及藍藻水華粗提物經口染毒對小鼠肝臟的毒性效應姓名：黃樸申請學位級別：博士專業(yè)：勞動衛(wèi)生與環(huán)境衛(wèi)生學指導教師：徐立紅20090501浙江大學博士學位論文中文摘要體途徑可能是MC誘導凋亡的主要通路。內質網途徑是近年才被證明的內源性細胞凋亡通路，由過度的內質網應激引起。當多種因素引起內質網應激發(fā)生，且強度超過細胞內質網自穩(wěn)定范圍時，細胞凋亡的內質網通路被開啟目前關于內質網凋亡通路是否參與MC誘導

2、的細胞凋亡還未見報道。MC家族成員眾多，各個成員由于結構的不同，其毒性作用及致毒機制存在差異。MC—RR是藍藻藻水華釋放到水體中主要MC之一，其對生物的毒性作用不可忽視，但目前在活體水平對其經口途徑的毒性研究，尤其在哺乳動物中的報道還不多。此外，生活在藍藻水體爆發(fā)水體中生物，并非處于單一毒素的暴露之中，水華釋放到水體中的眾多有害成分對它們有著復雜的毒性作用?；诖耍狙芯繉C家族中的重要成員MC—RR以及藍藻水華粗提物經口途徑暴露的毒

3、性作用及致毒機制進行了探討。本研究中，MC—RR和藍藻水華粗提物分別以46，23，46，93，1861tg／kg和46，23，46，93119／kgMC(RRLR)的劑量經灌胃方式連續(xù)7天染毒小鼠，第八天處死小鼠后摘取肝臟對MCRR和藍藻水華粗提物對肝臟的毒性作用及其凋亡機制進行研究：采用TUNEL法測定MCRR誘導肝組織細胞的凋亡率，通過檢測各種凋亡相關(蛋白因子)在染毒小鼠肝臟中的表達或活性變化來探究它們在細胞凋亡過程中的作用，包括

4、用普通顯微鏡直接觀察MCRR染毒后小鼠肝組織HE染色的結構變化，通過ROS底物DCFH—DA測定染毒后小鼠肝臟ROS的改變，通過測定MDA的含量來檢測毒素暴露小鼠脂質過氧化程度，用ealpain和PP2A活性檢測試劑盒測定MCRR染毒小鼠肝組織calpmn和PP2A酶活性的變化，用免疫印跡法(westernblot)檢測PP2AA和C亞基、Bax、Bcl2、p53、HSP70以及與內質網應激相關蛋白GRP78和CHOP的表達變化。實驗結