Wnt-β-catenin信號途徑及Sfrp1在梗阻性腎間質纖維化中作用的研究.pdf

1、目的：制作一種單側輸尿管梗阻（unilateral ureteral obstruction，UUO）大鼠模型，模擬梗阻后積水所導致的腎間質纖維化，動態(tài)觀察梗阻性腎病時腎組織Sfrp1、Wnt1及β-catenin的表達與變化情況。探討：Sfrp1、Wnt1及β-catenin在纖維化腎臟間質中的表達以及意義。進而篩選出能及早預測積水腎臟組織結構受損的實驗室指標，為臨床上腎積水的治療提供參考。
　　方法：選取48只健康清潔級Wis

2、tar雄性大鼠，均購自河北醫(yī)科大學實驗動物中心。體重180-200克。隨機分為模型組(UUO組，n=24)，假手術組(SOR組，n=24)。兩組大鼠在適宜的溫度及濕度條件下喂養(yǎng)。兩組大鼠均用2％戊巴比妥鈉0.3ml/100g腹腔注射麻醉并固定。取脊柱右側旁開3cm切口，依次切開各層組織，在腎盂和輸尿管的連接部以下2cm處，用細絲線各結扎兩處，并剪斷輸尿管，UUO大鼠模型建立完成。SOR組作為對照組，僅輕柔游離右側上段輸尿管至腎盂連接部，

3、不做任何處理。術后的3、6、9天分批脫頸處死各組8只大鼠。迅速取出右腎，沿冠狀位縱形剖開，取1/4腎組織置于4％多聚甲醛固定液，石蠟包埋成蠟塊后切成4μm的病理切片。HE染色后光鏡下動態(tài)觀察腎組織病理學改變，Masson染色后光鏡下動態(tài)觀察腎組織間質纖維化程度。采用免疫組化的方法測定間質中Sfrp1、Wnt1及β-catenin的表達，結果應用病理圖像及免疫組化分析系統(tǒng)，處理后分析得出半定量數(shù)值。相關數(shù)值用均數(shù)±標準差(x±S)表示,使

4、用SPSS13．0 for Window軟件進行統(tǒng)計學處理。兩組之間的比較，采用t檢驗；同一組內的比較，采用單因素方差分析(One-Way ANOVA)。并認為P<0.05時具有統(tǒng)計學差異。
　　結果：大體觀察：SOR組的右側腎呈豌豆大小，形態(tài)外觀大致正常。UUO組腎臟體積增大，可見明顯擴張的腎盂，腎實質受壓變薄。并且隨著梗阻時間的延長，以上變化愈顯著。
　　HE染色顯示：SOR組：腎組織無明顯異常改變。UUO組：梗阻后3d

5、可見個別的腎小管呈現(xiàn)輕度擴張，小管間質寬度相對增大，有少量炎性細胞散在浸潤；6d的腎小管出現(xiàn)擴張，偶見部分腎小管萎縮，腎小管上皮細胞腫脹、變性。腎小管周圍腎間質增寬，腎間質內散在有較多巨噬、淋巴細胞浸潤；9d的腎小管擴張明顯，腎小管結構破壞，可見腎小管基底膜彌漫性增厚、斷裂。腎間質寬度明顯增加，間質中巨噬、淋巴細胞浸潤進行性加重。纖維組織彌漫增生及膠原纖維化形成。
　　Masson染色后增寬的亮綠色膠原反映纖維化程度，間質相對面積

6、比較的結果顯示：SOR組在各時間點無明顯變化，UUO組較SOR組亮綠色面積明顯升高（P<0.05），且隨著造模時間延長，增寬的間質面積進行性增加，差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。
　　免疫組化結果：SOR組：腎間質中Wnt1、β-catenin基礎量低表達，各時間點比較無顯著差異(P>0.05)。腎間質中Sfrp1高表達，各時間點比較無顯著差異(P>0.05)。UUO組：Wnt1、β-catenin在腎間質的陽性表達高于對應時

7、間點的SOR組(P<0.05)，且隨著梗阻時間的延長而升高，差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。Sfrp1的陽性表達低于對應時間點的SOR組(P<0.05)，且隨著梗阻時間的延長而表達降低，差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。
　　結論：
　　1、 Wnt1、β-catenin的高表達是腎間質纖維化的重要機制之一，即Wnt/β-catenin對腎間質纖維化形成起重要作用。
　　2、 Sfrp1表達減少，對Wnt1抑制作