人谷氨酰半胱氨酸合成酶通過抑制JNK防止紫外刺激誘導的細胞死亡的研究.pdf

1、細胞死亡通路對于胚胎發(fā)育和正常組織穩(wěn)態(tài)的維持是必需的。在分子水平，細胞凋亡受到嚴格的調(diào)控。凋亡不足或過量凋亡都會引起各種疾病的發(fā)生比如：腫瘤、自體免疫性疾病或神經(jīng)退行性疾病的發(fā)生。因此，細胞凋亡在生物醫(yī)藥科學研究中也己成為重要的研究領域。對凋亡信號通路及其調(diào)節(jié)機制的研究為各種疾病的治療提供了新的思路。 為研究谷胱甘肽合成酶類谷氨酰半胱氨酸合成酶對紫外誘導的HEK293細胞死亡的影響，本實驗分為以下兩部分： 一：谷胱甘

2、肽合成酶類基因的克隆與誘導表達 通過PCR技術從人eDNA庫中擴增出GCLC(谷氨酰半胱氨酸合成酶催化亞基)和GSS(谷胱甘肽合成酶)，并分別將他們插到真核和原核質(zhì)粒的MCS位點中。利用這些重組載體的構建能夠為下一步研究GCLC對紫外刺激誘導細胞凋亡影響做好基礎。構建的原核重組載體分別用IPTG進行誘導表達能夠得到大量表達的目的蛋白，也可為兩種蛋白抗體的制備做好準備，從而在將來的工作里能夠有效的檢測到內(nèi)源和外源蛋白表達的變化。

3、 二:人谷氨酰半胱氨酸合成酶防止紫外刺激誘導HEK293細胞死亡的機制研究 人的谷氨酰半胱氨酸合成酶(Y-GCS)是谷胱甘肽合成的限速酶，而GCLC具有Y-GCS所有的催化活性。從形態(tài)上觀察GCLC能夠顯著地抑制紫外刺激誘導的HEK293細胞的死亡。MTS實驗和FACS檢測的結果也表明GCLC和JNK1APF的表達能夠提高細胞對紫外刺激的耐受性。通過Westernblotting技術檢測到UV能夠強烈的激活JNK、p