構建新型電化學DNA傳感器檢測結核分枝桿菌的研究.pdf

1、結核分枝桿菌DNA的檢測是檢測結核分枝桿菌，診斷結核病的重要方法。傳統(tǒng)檢測結核菌的方法，主要包括PCR，LAMP等，但他們具有一定的局限性，不能滿足結核病的快速，準確的檢測。電化學DNA傳感器作為一種新型的核酸檢測手段，具有優(yōu)異的選擇性，高靈敏度，便攜性和低成本的特點，具有廣闊的實驗和臨床應用前景。為了進一步考察驗證電化學傳感器對于結核分枝桿菌檢測的潛力，構建了基于結核特異性DNA片段的生物傳感器。
　　本研究主要內容包括：⑴構建

2、了一種用于檢測結核分枝桿菌特異性核酸序列（IS6110）的“三明治夾心型”DNA電傳感器。使用具有良好的電化學活性物質聚苯胺-石墨烯（PANI-rGO）納米復合物作為新的氧化還原納米探針，用于產生電流響應信號。然后，納米金膠體顆粒（AuNPs）修飾在PANI-rGO納米復合材料表面，用于固定信號探針以形成示蹤劑標記。在捕獲探針，目標DNA，示蹤劑標記物上的“三明治”雜交反應之后，可以觀察到有區(qū)別的檢測電流信號。該生物傳感器可以在1.0×

3、10-13-1.0×10-8 M的線性范圍內，檢測結核分枝桿菌特異性的IS6110核酸序列，相關系數為0.9976，最低檢測限達到5×10-14 M（S/N=3），實現(xiàn)了對結核分枝桿菌的超靈敏檢測。⑵為了評估該傳感器能否用于實際臨床檢測，對臨床肺結核病人與非肺結核病人的痰液的PCR產物樣本進行分析，發(fā)現(xiàn)該方法對于非肺結核病人的痰液標本幾乎沒有電流響應，而對于肺結核病人的痰液具有高的電流響應，這與PCR的結果一致。證明該方法能夠檢測臨床標