魚藤酮致帕金森大鼠腦內mGluR1a和GLT-1表達的改變.pdf

1、帕金森病(Parkinson’s disease，PD)又名震顫麻痹(Paralysis agitans)，是一種主要發(fā)生于中年以上人群的神經退行性疾病。其主要病理特點為選擇性的黑質多巴胺能神經元退行性變、腦內多巴胺含量減少及胞體內出現Lewy小體等。
　　近年有研究發(fā)現，PD患者紋狀體中多巴胺遞質缺乏將會導致基底神經節(jié)回路中谷氨酸能神經元活動的紊亂，同時谷氨酸能神經通路的過度激活在PD的癥狀產生過程中有重要作用。谷氨酸(glut

2、amate，Glu)是中樞神經系統(tǒng)內一種重要的興奮性神經遞質，當它被釋放到突觸間隙后，通過與代謝型谷氨酸受體(mGluRs)結合調節(jié)突觸傳遞和神經元的興奮性過程。谷氨酸轉運體-1(glutamate transporters-1，GLT-1)是谷氨酸轉運體(glutamate ransporter EAATs)的一個亞型，它能逆濃度梯度從胞外向胞內攝取谷氨酸，使胞外谷氨酸濃度保持在較低水平，EAATs的功能一旦受損，突觸間隙內的Glu濃

3、度升高，繼而使突觸后膜神經元興奮，甚至產生興奮性神經毒性作用。目前對帕金森病的治療尚缺乏理想的治療藥物，因此，本研究通過觀察分析mGluR1α和GLT-1在PD模型腦內的表達改變，探討mGluR1α和GLT-1在PD發(fā)生發(fā)展過程中所起的作用，為尋找PD治療的新靶點提供形態(tài)學依據。
　　流行病學顯示PD的誘因多樣而復雜，環(huán)境因素一直受到人們的關注。魚藤酮是一種被廣泛使用的殺蟲劑，為高脂溶性，極易透過生物膜和血腦屏障。能特異性的抑制線

4、粒體復合體I，造成細胞氧利用障礙。同時魚藤酮還能夠通過微管解聚機制，產生大量自由基，破壞神經元的功能。近年來，有研究發(fā)現給予魚藤酮后大鼠出現的癥狀和發(fā)生的病理改變，很好的模擬了人類帕金森病的特征改變。因此本實驗選擇了帕金森病的魚藤酮大鼠模型作為研究對象。
　　目的：本研究采用魚藤酮皮下注射方法制備PD大鼠模型，觀察分析魚藤酮制備的PD大鼠腦內mGluR1α和GLT-1的表達改變，從而為PD的研究及其治療提供新的形態(tài)學依據。

5、　　方法：選用300g左右雄性SD大鼠，隨機分為對照組，3天組，28天組，實驗組背部皮下注射魚藤酮分別為3天和28天(1.5mg/Kg)，對照組大鼠背部皮下注射相同劑量葵花油。以免疫印跡技術檢測大鼠黑質酪氨酸羥化酶(Tyrosine hydroxylase，TH)的含量的改變，確定PD大鼠模型成功與否；以免疫組織化學技術檢測大鼠腦內尾殼核(CPu corpus striatum)和伏核(Acb accumbens)區(qū)域GLT-1和mGl

6、uR1α的表達情況。
　　結果：
　　1.魚藤酮的毒性作用：自注射魚藤酮第三天開始大鼠逐漸出現理毛動作減少致使毛色又臟又黃、并有呸毛現象；同時還伴有精神萎靡、自由活動減少、弓背姿勢、肢體震顫、嚴重者可有四肢行動不能尤以下肢為重；嗅覺和覓食動作減少、體重逐漸減輕等；部分大鼠還會出現腹瀉及口腔出血等現象。此階段為大鼠死亡的高發(fā)期，整個模型制備過程大鼠的死亡率為31.58％。但隨著給要時間的增長大鼠PD癥狀出現好轉，具體原因有待以

7、后實驗的進一步研究。
　　2.Western blot結果：與對照組相比魚藤酮組TH與β-actin條帶相對光密度比值明顯降低。魚藤酮組TH與β-actin條帶相對光密度值的比值在黑質為0.189±0.026，比對照組減少了66.5％(P<0.01)。
　　3.免疫組化結果：
　　(1)mGluR1α免疫組化結果：魚藤酮組大鼠mGluR1α的免疫反應強度降低。通過光密度值分析發(fā)現魚藤酮28天組大鼠CPu的DM、VM、V

8、L、DL部位的mGluR1α免疫反應染色平均光密度值比對照組分別降低了23.35％、21.93％、15.59％和43.28％，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01)，而Acb部位平均光密度值比對照組降低了4.89％，差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。
　　(2)GLT-1免疫組化結果：
　　1)魚藤酮3天組：通過光密度值分析發(fā)現，魚藤酮3天組DM部位GLT-1的平均光密度值比對照組降低了0.8％，VM、VL、DL部位的GLT-1平

9、均光密度值比對照組分別升高了5.9％、16.8％和14％，其中只有VL部位的差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01)，其他部位無統(tǒng)計學意義，但存在升高的趨勢。與對照組相比，Acb部位平均光密度值降低了7.5％，差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。
　　2)魚藤酮28天組：通過光密度值分析發(fā)現，魚藤酮28天組CPu的DM、VM、VL、DL部位的GLT-1平均光密度值比對照組分別升高了24.39％、34.19％、41.58％和47％，差異有統(tǒng)計

10、學意義(P<0.01)。與對照組相比，Acb部位的平均光密度值升高了6.7％，差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。
　　3)28天組與3天組相比，CPu的DM、VM、VL、DL部位的GLT-1平均光密度值分別升高了25.41％、26.61％、21.17％和28.95％，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01)；Acb部位GLT-1平均光密度值升高了15.31％，差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。
　　結論：
　　1.魚藤酮具有明