孤兒核受體Nur77調控小膠質細胞激活及其介導的多巴胺能神經元神經毒性機制研究.pdf

1、目的：探討孤兒核受體Nur77在小膠質細胞激活中的調控作用及機制，并研究其抑制小膠質細胞激活介導的神經炎癥對多巴胺能神經元毒性的保護作用。
　　方法：用MPTP誘導小鼠帕金森?。≒arkinson’s disease，PD）模型，免疫組織熒光法觀察Nur77在小鼠小膠質細胞上的表達。用LPS激活原代小膠質細胞和BV2小膠質細胞系模擬體內小膠質細胞激活內環(huán)境，觀察Nur77在小膠質細胞激活中表達變化和調控作用。過表達Nur77慢病毒

2、感染BV2細胞，用Griess法檢測LPS誘導激活后NO釋放量，實時定量PCR（Real-time quantiative PCR，q-RCR）和蛋白免疫印跡（Western Blot，WB）檢測炎性因子iNOS、COX-2、IL-1β和TNF-α表達變化。Nur77敲低慢病毒感染BV2細胞，LPS誘導激活后觀察炎性因子的變化。同時預處理給予Nur77特異性激動劑CsnB，研究其對小膠質細胞激活的調控作用。表達NF-κB轉錄報告基因的B

3、V2細胞過表達Nur77或者用CsnB預處理，探討Nur77對LPS誘導的NF-κB轉錄活性的影響。WB檢測過表達Nur77或者CsnB對激活的小膠質細胞NF-κB核轉位調控作用，及對NF-κB抑制蛋白IκBα磷酸化水平和降解水平的影響；同時探討過表達 Nur77或 CsnB對激活小膠質細胞內MAPK通路活化的調控作用。用BV2小膠質細胞條件培養(yǎng)基與MN9D多巴胺能神經元共培養(yǎng)模擬PD發(fā)病時小膠質細胞激活對神經元的損傷，流式細胞儀檢測神

4、經元的凋亡水平，觀察Nur77對神經炎癥引起的神經毒性保護作用。
　　結果：Nur77在小膠質細胞中表達，在PD小鼠模型中黑質致密部多巴胺神經元損傷伴隨激活的小膠質細胞內Nur77熒光強度降低。原代培養(yǎng)小膠質細胞和BV2小膠質細胞在LPS激活后，Nur77 mRNA和蛋白表達下調并且呈時間依賴性。BV2細胞過表達Nur77可以顯著抑制LPS激活小膠質細胞后炎性因子iNOS、COX-2、IL-1β和TNF-α的表達，進一步發(fā)現預處理

5、給予Nur77激動劑CsnB可以劑量依賴性抑制炎性因子釋放。相反，敲低Nur77后上調LPS誘導小膠質細胞內炎性因子表達。Nur77抗炎作用機制與抑制NF-κB轉錄及其核轉位，減少IκBα磷酸化和降解，并且抑制MAPK中p38磷酸化水平有關。小膠質細胞條件培養(yǎng)基共培養(yǎng)發(fā)現過表達Nur77可以減輕小膠質細胞激活后對MN9D細胞的神經毒性。
　　結論：明確Nur77在小膠質細胞中表達，并且對小膠質細胞激活具有重要的調控作用，過表達Nu