LMNA基因復雜突變引起家族性房室傳導阻滯伴擴心病機制研究.pdf

1、目的：房室傳導阻滯（atrioventricular block，AVB）是指在心臟電激動傳導過程中，由于心房和心室之間的電傳導異常而導致的心律失常。根據傳導阻滯的嚴重程度可分為Ⅰ度、Ⅱ度和Ⅲ度房室傳導阻滯，隨著分子生物學和遺傳學研究的深入，發(fā)現AVB具有一定的遺傳風險因素，并確定了多個致病基因。前期工作中，我們在臨床中發(fā)現了一個遺傳性Ⅲ度房室傳導阻滯伴擴張型心肌?。╠ilated cardiomyopathy，DCM）家系，本次研究主

2、要對其進行致病基因鑒定與機制研究。
　　方法：首先，采用候選基因測序對已經確診為AVB的患者進行檢測，對已發(fā)現的AVB及DCM致病基因TRPM4，SCN5A，SCN1B，NKX2.5，CLCA2，LMNA進行測序并確定；其次，構建致病基因的野生型和突變型真核表達體系，將野生型和突變型質粒轉染至人宮頸癌細胞系（Hela），激光共聚焦顯微鏡檢測野生和突變型蛋白在細胞定位和蛋白表達情況，利用Western-blot檢測目的蛋白的表達情況

3、并對該突變功能進行分析。
　　結果：遺傳學分析及測序結果顯示，在家系患者中LMNA基因第10號外顯子存在缺失，并且第九號內含子靠近十號外顯子處發(fā)生了部分堿基的缺失，這是一種新的復雜突變形式，并且與疾病共分離；Western-blot結果顯示突變型lamin蛋白表達水平異常，激光共聚焦亞細胞定位結果顯示突變型蛋白位置異常：正常野生型lamin僅在細胞核纖層表達，而突變型蛋白在細胞核纖層及核內均有表達且細胞核結構異常；LMNA基因表達

4、異?？梢鸱渴医Y細胞發(fā)生自噬和凋亡或纖維化，導致房室傳導速率降低，并發(fā)生房室傳導阻滯，應用Western-blot檢測自噬的標志蛋白LC3-II后，結果顯示此LMNA突變形式不影響LC3-II蛋白表達。
　　結論：本次研究中，我們發(fā)現了一個新的LMNA基因復雜突變類型，該變異可使其編碼的蛋白表達和定位異常并導致細胞核核纖層結構異常，最終導致遺傳性房室傳導阻滯伴擴張型心肌病的發(fā)生。核纖層在細胞分裂中呈現周期性的變化，因此核纖層的異常