高效重組穿膜肽-vp3的篩選及其對(duì)Hela細(xì)胞的抑制作用.pdf

1、目的：構(gòu)建可溶性表達(dá)PTD4-apoptin、R9-apoptin、hC-SOD3-apoptin三種融合蛋白的原核表達(dá)載體，檢測(cè)其對(duì)Hela癌細(xì)胞的凋亡作用，并篩選出抑制效果最強(qiáng)的，具有高活性和強(qiáng)細(xì)胞滲透性的穿膜肽-apoptin。
　　方法：選用pGEX-6p-1質(zhì)粒，構(gòu)建pGEX-6p-1-PTD4-apoptin、pGEX-6p-1-R9-apoptin和pGEX-6p-1-hC-SOD3-apoptin原核表達(dá)載體，使三

2、種表達(dá)載體在大腸桿菌E.coli BL21（DE3）中表達(dá)。經(jīng)IPTG誘導(dǎo)表達(dá)，GST親和層析柱、超濾管濃縮純化后，得到高濃度的融合蛋白。與Hela細(xì)胞共同孵育，通過(guò)MTT檢測(cè)PTD4-apoptin、R9-apoptin和hC-SOD3-apoptin三種融合蛋白對(duì)Hela細(xì)胞的凋亡作用。
　　結(jié)果：成功構(gòu)建PTD4-apoptin、hC-SOD3-apoptin和R9-apoptin的可溶性表達(dá)融合蛋白，并在大腸桿菌轉(zhuǎn)化，經(jīng)純

3、化后的得到高濃度融合蛋白，與Hela癌細(xì)胞共同孵育，PTD4-apoptin、hC-SOD3-apoptin和R9-apoptin三種融合蛋白具有促進(jìn)Hela癌細(xì)胞凋亡的作用。PTD4-apoptin對(duì)Hela細(xì)胞的抑制率82.34％，hC-SOD3-apoptin對(duì)Hela細(xì)胞的抑制率66.60%，R9-apoptin對(duì)Hela細(xì)胞的抑制率45.03%。
　　結(jié)論：成功表達(dá)了PTD4-apoptin、R9-apoptin、hC-