類波氏真眼點藻二酰甘油?；D移酶(DGAT)基因的克隆與功能分析.pdf

1、暨南大學碩士學位論文暨南大學碩士學位論文類波氏真眼點藻二酰甘油?；D移酶（類波氏真眼點藻二酰甘油?；D移酶（DGAT）基因的克隆與功能）基因的克隆與功能分析分析CloningfunctionalanalysisofdiacylglycerolacyltransferasegenesinEustigmatoscf.polyphem作者姓名：王元麗王元麗指導教師姓名李愛芬李愛芬張成武張成武及學位、職稱：博士博士教授教授學科、專業(yè)名稱：水生生

2、物學水生生物學論文提交日期：2014年5月論文答辯日期：2014年6月答辯委員會主席：論文評閱人：學位授予單位和日期：暨南大學碩士學位論文類波氏真眼點藻二酰甘油酰基轉移酶（DGAT）基因的克隆與功能分析I摘要摘要類波氏真眼點藻（Eustigmatoscf.polyphem）屬于異鞭藻門（Heterokontophyta）真眼點藻綱（Eustigmatophyceae），是一種土壤黃綠色單細胞微藻。前期研究證實，該藻能合成多不飽和脂肪酸、

3、β胡蘿卜素和金藻昆布糖等高附加值生物活性物質，特別是在氮限制培養(yǎng)后期能大量積累儲藏性油脂，是一株具有生物產品和生物燃料開發(fā)潛能的微藻。本文以類波氏真眼點藻（E.cf.polyphem）為研究材料，克隆藻細胞TAG合成途徑中二酰甘油酰基轉移酶（Diacylglycerolacyltransferase，DGAT）基因的cDNA全長序列，通過外源表達確定基因的具體功能，探討類波氏真眼點藻（E.cf.polyphem）在氮限制培養(yǎng)時TAG積累

4、過程中DGAT的轉錄水平表達情況，了解類波氏真眼點藻（E.cf.polyphem）中TAG合成代謝的分子機理與調控機制，為微藻生物能源的開發(fā)提供一定的理論依據。研究結果如下：（1）利用RACE技術擴增得到類波氏真眼點藻（E.cf.polyphem）二酰甘油酰基轉移酶基因EcfpDGATb的cDNA全長序列2347bp，同時分別得到EcfpDGATa和EcfpDGATc的3’cDNA序列309bp和480bp。（2）DNA序列分析發(fā)現Ec

5、fpDGATb全長cDNA含有23bp5’和338bp3’非翻譯區(qū)（UntranslatedRegions，UTR）序列，開放閱讀框（OpenReadingFrame，F）1986bp，編碼661個氨基酸；該蛋白質N端具有43個氨基酸長度的預測信號肽和9個預測跨膜區(qū)，結構域中包含6個II型DGAT的保守基序，說明EcfpDGATb可能屬于編碼II型DGAT的基因家族成員。（3）EcfpDGATb的異源表達證實其能使TAG合成缺陷酵母菌株

6、恢復部分的油滴積累能力，并偏好于利用16C不飽和與18C脂肪酸合成TAG，說明EcfpDGATb參與TAG的生物合成過程。（4）EcfpDGATb的mRNA相對表達量在兩種硝酸鈉濃度培養(yǎng)條件下都呈現先上升后下降的趨勢，在高氮組（18mmolLNaNO3）中培養(yǎng)36h時達到最高相對表達量，低氮組（6mmolLNaNO3）在96h達到最高，表明EcfpDGATbmRNA水平的表達對氮限制有一定的響應。關鍵詞關鍵詞：類波氏真眼點藻；二酰甘油酰