葛根素對大鼠成骨細胞OPG和RANKL mRNA表達影響的研究.pdf

1、研究目的：
　　 本課題通過建立大鼠成骨細胞體外培養(yǎng)實驗模型,在細胞和分子水平上觀察葛根素對大鼠成骨細胞增殖、分化及基因表達的影響,探討葛根素防治絕經后骨質疏松癥的作用機制,為葛根素應用于臨床防治絕經后骨質疏松癥提供實驗依據(jù)。
　　 方法：
　　 1.采用多次酶消化法分離新生24h內大鼠顱蓋骨進行大鼠原代成骨細胞體外培養(yǎng),通過相差顯微鏡觀察成骨細胞形態(tài),并用堿性磷酸酶染色方法對所獲得的細胞進行鑒定。
　　

2、 2.采用MTT法觀察葛根素對大鼠成骨細胞的影響
　　 3.采用RT-PCR的方法觀察葛根素對大鼠體外培養(yǎng)成骨細胞OPG和RANKLmRNA表達的影響
　　 結果：
　　 1.新生大鼠成骨細胞體外培養(yǎng)模型建立成功,證實所培養(yǎng)細胞具有體內成骨細胞的形態(tài)學和生物學特性。
　　 2.不同濃度的葛根素(10-4μmol/L～100μmol/L)作用于大鼠成骨細胞24h和48h均表現(xiàn)出顯著的促增殖作用:培養(yǎng)72h及

3、96h,實驗結果顯示各濃度組均無明顯的增殖作用。
　　 3.葛根素可明顯地促進大鼠成骨細胞OPGmRNA的表達,抑制RANKLmRNA的表達。
　　 結論：
　　 1.不同濃度的葛根素作用于大鼠成骨細胞表現(xiàn)出明顯的增殖作用,其增殖的大小與葛根素濃度及作用時間有密切的關聯(lián)。
　　 2.葛根素可以上調OPG基因的表達,下調RANKL基因的表達,從而調節(jié)骨吸收,這可能是葛根素防治絕經后骨質疏松癥的重要機制之一。