小鼠骨髓來源的祖細胞亞群分化能力及心梗修復能力的比較研究.pdf

1、目的：研究小鼠骨髓來源的Sca-1+/CD31+亞群與Sca-1+/CD31-亞群在向心肌細胞和血管內(nèi)皮細胞的分化能力及其心梗修復能力的差異。
　　方法：從小鼠骨髓中分離出具有多向分化潛能的骨髓單個核細胞(Bone Mononuclear Cells，BMNCs)，進一步通過流式細胞術分選出 Sca-1+/CD31+亞群與Sca-1+/CD31-亞群。在添加血管內(nèi)皮細胞生長因子（VEGF），成纖維細胞生長因子（hFGF-B），表皮

2、細胞生長因子（EGF），胰島素生長因子（R3-IGF-1）和抗壞血酸（Ascorbic acid）的5％FBS/EBM-2中培養(yǎng)14天，進而通過免疫熒光染色和RT-PCR檢測內(nèi)皮細胞標志物vWF，VE-cadherin和CD31的表達。以此來比較骨髓來源的不同祖細胞亞群向血管內(nèi)皮細胞定向分化能力的差異。在添加Wnt通路拮抗劑DKK-1，二甲基亞砜（DMSO），骨形態(tài)發(fā)生蛋白（BMP-2），成纖維細胞生長因子（FGF-4和FGF-8），以

3、及5-氮胞苷（第一至第三天）的基礎培養(yǎng)基中培養(yǎng)14天，進而通過免疫熒光染色和RT-PCR檢測心肌細胞標志物Nkx2.5，cTnT和GATA-4等的表達。從而比較小鼠骨髓來源的不同祖細胞亞群向心肌定向分化能力的差異。氣管插管開胸行小鼠冠狀動脈前降支（LAD）結扎，建立小鼠心肌梗死的模型。將 Sca-1+/CD31+亞群、Sca-1+/CD31-亞群和單個核細胞（MNCs）注射入梗死心肌周圍，7天和28天后分別檢測心臟超聲并于28天取心臟組

4、織，檢測細胞存活、血管再生和心肌纖維化程度。
　　結果：免疫熒光染色和 RT-PCR的結果表明，在血管內(nèi)皮細胞誘導培養(yǎng)基中，Sca-1+/CD31+亞群更易于分化成血管內(nèi)皮細胞，而 Sca-1+/CD31-亞群增殖緩慢，內(nèi)皮細胞的標志物表達很低；在心肌細胞誘導培養(yǎng)基中，Sca-1+/CD31-亞群更易于分化成心肌細胞，cTnT的陽性表達率高于 Sca-1+/CD31+亞群和 MNCs。體內(nèi)注射骨髓來源的祖細胞亞群，心臟彩超提示：7