21三體綜合征21qCpG島DNA甲基化水平研究.pdf

1、實驗目的：21三體綜合征是由于21號染色體不分離所導致的一種染色體病，表現(xiàn)為嚴重的智力發(fā)育障礙和多發(fā)性先天畸形，是臨床最常見的嚴重出生缺陷之一，由于該病缺乏有效的治療手段，給社會、家庭帶來異常沉重的負擔，因而進行孕早期篩查和產(chǎn)前染色體診斷是降低其發(fā)生率的有效途徑。但目前仍未見21三體患者CpG島DNA甲基化狀態(tài)的相關報道，因此，研究21三體患者CpG島甲基化狀態(tài)，這對探索更有效、更特異的用于21三體產(chǎn)前風險評估的表觀遺傳學分子靶點具有重

2、要的科學意義和臨床實踐價值。
　　 實驗方法：運用HpaⅡ-McrBC PCR(HM-PCR)方法篩檢分析21qCpG島甲基化狀態(tài)。首先從UCSC數(shù)據(jù)庫獲得21qCpG島DNA序列，并與華大基因炎黃數(shù)據(jù)庫比對，驗證序列和引物。然后建立HM-PCR檢測方法，并利用HM-PCR技術篩查和分析了150例21三體患者21q上2690個CpG島，并將患者CpG島甲基化狀態(tài)與正常個體進行比較。
　　 實驗結果：本研究首先驗證了149

3、個CpG島的DNA序列和148對CpG島引物的準確性，明確序列和引物在中國漢族人群運用的可行性。建立了簡化的HM-PCR方法。HM-PCR篩查發(fā)現(xiàn)21三體患者21號染色體長臂的CpG島中，98個無甲基化，30個完全甲基化，12個雜合甲基化，8個不完全甲基化，在健康個體21號染色體長臂的148個CpG島中也得到完全相同結果。有4個雜合甲基化CpG島(編號：11，15，27，71)與日本人存在差異，日本人群呈現(xiàn)出無甲基化狀態(tài)；有1個雜合甲基

4、化CpG島(編號：93)與日本人不一致，日本人群呈現(xiàn)出完全甲基化狀態(tài)。這種差異是否是種族之間的差異，尚需對這5個CpG島進行重亞硫酸鹽測序確認。第103號CpG島沒有HpaⅡ和HhaⅠ酶切位點，因此，需要利用重亞硫酸鹽測序檢測。
　　 實驗結論：21三體患者與健康個體之間在21qCpG島上不存在DNA甲基化狀態(tài)的差異；21qCpG島DNA甲基化狀態(tài)在同一種族內(nèi)高度一致，那么21qCpG島DNA甲基化狀態(tài)可否為種族間識別的表觀遺傳